2.2 不同開花時期花粉的活力測定

研究發(fā)現(xiàn)，多花指甲蘭最佳染色時長為12h。實驗結果表明，TTC染色液和醋酸洋紅染色效果最接近離體萌發(fā)結果，而I₂-KI染液會使整個視野變紅，不利于觀測；開花4～6d的花粉染色效果最好，顏色最深，染色率最高（圖5），花蕾期染色較淺，呈粉紅色，且染色數(shù)目較少，開花10d的花粉幾乎無法染色，染色極淺。整個花期花粉活力先上升到達最高值，之后下降，呈先升后降趨勢。

2.3 不同開花時期柱頭可授性研究結果

利用聯(lián)苯胺-過氧化氫法測定多花指甲蘭柱頭可授性（表2），結果顯示3個時期的柱頭在檢測液中均冒出氣泡，其中盛花期過氧化氫酶含量最高，氣泡量最大，冒出最迅速，可授性最強。花蕾期次之；衰敗期最少最緩慢，可授性最弱；但3個時期的柱頭均未變色。

3 討論

花粉為植物的生殖細胞，它能反映物種演化的一般規(guī)律，花粉的性狀相對穩(wěn)定，其微觀態(tài)結構具有種間特異性，是植物分類的重要依據(jù)之一。

蘭科植物花粉不同于其他植物，蘭科植物花粉由成千上萬的花粉粒通過類脂質(zhì)集合而成。花粉粒由四分體組成的，四分體是構成花粉的基本單位。不同種屬蘭花花粉形態(tài)、表面紋飾不一。如蝴蝶蘭花粉塊為梨形，中間有大縫隙，花粉塊可分為兩半；杓蘭屬花粉表面都有圓形凹陷，外壁結構呈光滑或褶皺狀。多花指甲蘭花粉近球形，表面具裂隙，無紋飾，類似蜂巢，未見萌發(fā)孔。

由于花粉粒結合緊密，相互擠壓，花粉粒呈不規(guī)則狀。隨著開花時間的延長，花粉粒粘合得更加緊密，花粉團體積也相應變小。花粉活性與柱頭可授性是影響雜交結實率的關鍵因素，本研究發(fā)現(xiàn)，花粉染色在開花4～6d效果最好，花蕾期次之，衰敗期幾乎無法染色?；ǚ刍钚耘c自身遺傳特性有關，羅遠華等研究發(fā)現(xiàn)不同的文心蘭種質(zhì)花粉活力不同。同時還與環(huán)境溫度、花期長短等多種因素有關，且蘭花花粉團是由花粉粒依靠類脂質(zhì)聚合而成的，分離困難，一定程度上增加了實驗難度。結果表明，最接近真實值的花粉染色方法為TTC染色法和醋酸洋紅染色法，I₂-KI的測量值遠大于其他3種方法。這是由于I₂-KI是根據(jù)花粉粒積累淀粉的量來判斷花粉活力，而三核期退化的花粉已有淀粉積累，遇碘呈藍色反應另外，含有淀粉而被殺死的花粉粒遇I₂-KI也呈藍色，因此，此法不能準確表示花粉的活力。

開花10d以后TTC染液和醋酸洋紅染液幾乎無法將花粉染色，而花粉萌發(fā)率依然較高，這很可能是因為開花后期花粉粒結合過于緊密，類脂質(zhì)阻礙了染色液的進入，導致染色困難。蘭花花粉屬于二核型花粉，有厚實的外壁，壽命很長，易于保存，不會輕易失活。兜蘭、蝴蝶蘭等花粉活力均表現(xiàn)為先上升后下降的趨勢，這與我們的研究結果一致。柱頭可授性的結果顯示多花指甲蘭開花5d可授性最好，但3個時期的柱頭在檢測液中均未變色，該現(xiàn)象在其他植物中也有出現(xiàn)，如蘇蕓蕓用同種方法研究了藿香的柱頭可授性，亦只見氣泡，未見柱頭變色。多花指甲蘭花粉活力最高時期與柱頭可授性時期一致，可選擇開花4～6d時對多花指甲蘭進行人工授粉。

洋蘭的野生種大都艷而無香，因而培育有香味的洋蘭品種是今后洋蘭育種的主要目標之一。黃金小神童是花香引入的典范，為大花蕙蘭與四季蘭素心的雜交種，氣味幽香。多花指甲蘭花香清幽、花型美麗，后期可大力開展該種與其近緣種屬之間的雜交育種研究。

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