1.2.3反應(yīng)摩爾比的確定

取0.1 mL二茂鐵標準溶液和1 mL不同濃度（3.15～44.15 mmol/L）的過氧化氫異丙苯溶液于不同的試管中，加入用異丙醇定容至5 mL，加入0.1 mL甲酸后用異丙醇定容至5 mL。在60℃的恒溫水浴條件下加熱40 min，結(jié)束后立即用流動水冷卻至室溫，使用異丙醇校準基線在310 nm處檢測吸光度值，通過二茂鐵與過氧化氫異丙苯在不同摩爾比時的吸光度確定二者反應(yīng)的飽和摩爾比。

1.2.4酸催化劑的選擇

試管中加入1 mL二茂鐵標準溶液后，加入1 mL濃度為15.77 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液，然后分別加入0.1 mL有機酸（甲酸，乙酸）和無機酸（硫酸），異丙醇定容至5 mL。60℃的恒溫水浴鍋中反應(yīng)40 min，反應(yīng)完成后在200～600 nm下進行全波長掃描。

1.2.5溫度和時間的影響

選擇30，40，50，60，70℃5組不同的溫度。每個樣品中分別加入1 mL二茂鐵標準溶液和1 mL濃度為15.77 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液，加入0.1 mL甲酸后用異丙醇定容至5 mL，在不同的反應(yīng)溫度下加熱40 min，反應(yīng)后冷卻至室溫在310 nm處進行檢測。設(shè)置10，20，30，40，50 min反應(yīng)時間，同樣的反應(yīng)條件下在310 nm處檢測吸光度變化。

1.2.6過氧化氫異丙苯標準曲線的繪制

取0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，1.0 mL濃度為15.77 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液于試管中，加入1 mL二茂鐵標準溶液和0.1 mL甲酸，異丙醇定容至5 mL，在最佳檢測條件下以過氧化氫異丙苯的濃度(x)為橫坐標，吸光度值(y)為縱坐標繪制標準曲線。按式（2）計算油脂過氧化值。

式中：

PV——過氧化值，mmol/kg；

Y——樣品的吸光度；

B——空白的吸光度；

A——標準曲線的系數(shù)；

M——取樣量，g；

V——定容體積，mL。

1.2.7檢出限和定量限

參照文獻的方法確定二茂鐵法的檢出限。在玻璃管種分別加入0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0 mL的1.58 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液，再加入1 mL二茂鐵標準溶液和0.1 mL的甲酸，用異丙醇定容至5 mL（相當于樣品中過氧化氫異丙苯濃度為0.00，0.03，0.06，0.10，0.13，0.16，0.19，0.22，0.252，0.28，0.32 mmol/L）。在恒溫水浴鍋中60℃加熱40 min，加熱結(jié)束后立即用流動水冷卻至室溫，在310 nm處檢測其吸光度。得到檢出限的估計值后按照加標濃度為估計檢出限的1～5倍范圍確定過氧化氫異丙苯添加量，在干凈的試管中加入合適的過氧化氫異丙苯溶液（15.77 mmol/L），再加入1 mL二茂鐵標準溶液和0.1 mL的甲酸，用異丙醇定容至5 mL，在60℃下加熱40 min，加熱結(jié)束后立即用流動水冷卻至室溫，在310 nm處檢測吸光度值，共檢測7組平行。根據(jù)式（3）求得方法檢出限，以方法檢出限的3.3倍為定量限。

式中：

LD——方法檢出限，mmol/L；

s——加標樣品測試結(jié)果的標準偏差；

t——自由度為n-1時的Student's值，可查值表得到，當n=7時，在99%置信區(qū)間（α=0.01）下，t=3.14；

n——加標樣品數(shù)量，一般取7。

1.2.8回收率

在試管中分別加入1 mL空白油樣、低加標油樣（3.15 mmol/L過氧化氫異丙苯）、中加標油樣（7.89 mmol/L過氧化氫異丙苯）、高加標油樣（12.62 mmol/L過氧化氫異丙苯），再加入1 mL二茂鐵標準溶液和0.1 mL的甲酸，用異丙醇定容至5 mL，在60℃條件下加熱40 min，然后在310 nm下檢測樣品的吸光度值。

1.2.9滴定法測定過氧化值

按GB 5009.227—2016執(zhí)行。

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