防腐劑是為了防止食品因微生物等引起的腐敗變質(zhì)所添加的，使食品在一般的自然環(huán)境中具有一定的保存期。但目前食品添加劑超量、超范圍使用的現(xiàn)象很多，苯甲酸、山梨酸和對羥基苯甲酸酯類是使用最廣泛的防腐劑。

醬油是中國傳統(tǒng)的調(diào)味品，生產(chǎn)中主要用到的添加劑為：苯甲酸鈉，山梨酸，對羥基苯甲酸酯類及其鈉鹽，在GB2760-2014中規(guī)定的最大使用量依次是1.0g/kg、1.0g/kg、0.25g/kg。對于純牛奶，根據(jù)GB2760—2014要求為不得檢出，蛋白飲料中苯甲酸的最大使用量是1.0g/kg；飲料類山梨酸最大使用量是0.5g/kg，對羥基苯甲酸酯類是0.25g/kg。

糠醛、5-甲基糠醛在GB2760-2014中規(guī)定為允許使用的食品用香料，但在附錄表B.1不得添加食品用香料、香精的食品名單中有牛奶、蜂蜜，所以為不得檢出。同時含糖的食品在加工和貯存過程中，會發(fā)生糖的熱降解反應(yīng)和美拉德反應(yīng)，這兩個反應(yīng)均會產(chǎn)生5-羥甲基糠醛(5-HMF)，進而熱分解產(chǎn)生糠醛和5-甲基糠醛?？啡╊愇镔|(zhì)在體內(nèi)不斷積累會引起中毒。

目前測定這5類防腐劑和3類糠醛類物質(zhì)含量的方法主要有氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、高效液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜法。GB/T18932.18-2003即采用液相色譜/紫外檢測法測定蜂蜜中的羥甲基糠醛含量，并制定了限量要求。而目前同時測定這6類食品中苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、糠醛、5-甲基糠醛和5-羥甲基糠醛含量的方法尚未見報道。因而建立一種快速、方便、經(jīng)濟的檢測方法，有利于保障人們的消費安全。本文采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用快速測定醬油、牛奶、飲料、黃酒、啤酒、蜂蜜中糠醛類物質(zhì)和防腐劑類物質(zhì)，對樣品的前處理方法及GC-MS/MS分析條件進行優(yōu)化，GC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)進行測定，能夠滿足醬油、牛奶、飲料、黃酒、啤酒、蜂蜜中3種糠醛類物質(zhì)和5種防腐劑的檢測。

一、材料與方法

1、材料與試劑

標(biāo)準(zhǔn)品：糠醛(CAS號：98-01-1)、5-甲基糠醛(CAS號：620-02-0)、5-羥甲基糠醛(CAS號：67-47-0)(百靈威科技有限公司，純度≥98％)；苯甲酸(CAS號：65-85-0)、山梨酸(CAS號：110-44-1)、對羥基苯甲酸甲酯(CAS號：99-76-3)、對羥基苯甲酸乙酯(CAS號：120-47-8)、對羥基苯甲酸丙酯(CAS號：94-13-3)(德國sigma公司，純度≥99％)；乙腈、丙酮(色譜純，美國TIDE公司)；正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯(分析純，購買于華東醫(yī)藥有限公司)，無水硫酸鎂、無水硫酸鈉(分析純，購買于華東醫(yī)藥有限公司)；實驗用水為蒸餾水。

2、儀器與設(shè)備

BmkercP450-300三重四極桿質(zhì)譜儀(C-MS/MS)；高速離心機(HealForce公司)。

3、方法

（1）色譜條件

①氣相色譜測定氣相色譜條件：色譜柱：WAX-58(25m×0.32mm×1.2μm)彈性石英毛細(xì)管柱，進樣口溫度230℃；柱升溫程序：初溫50℃保持0.5min，以25℃/min的速率升溫到250℃保持11.5min，共20min；載氣：高純氦氣(99.999％)，柱流量1.0mL/min恒定流量模式；進樣量：1.0μL。

質(zhì)譜條件：電子轟擊源(EI)，離子源溫度230℃；傳輸線溫度250℃；腔體溫度40℃；溶劑延時4.5min；分段掃描。碰撞氣：氬氣，壓力為0.2Pa(1.5mT0rr)；碰撞能量：針對每種化合物進行優(yōu)化；8種物質(zhì)的定性、定量離子和多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)參數(shù)見表1。

4、樣品前處理

（1）飲料、黃酒、啤酒、蜂蜜

稱取試樣2g(飲料、黃酒、啤酒、蜂蜜，精確至0.01g)于20mL刻度磨口試管中(其中蜂蜜需要加60℃溫水5.0mL溶解)，加入10.0mL乙腈，加少量無水硫酸鎂，充分振蕩搖勻2min，于600r/min離心3min，取上清液過0.45μm有機相濾膜后，進行GC-MS/MS分析。

（2）醬油、牛奶

稱取試樣2g(醬油、牛奶，精確至0.01g)于50mL離心管中，加入10.0mL乙腈，250r/min渦旋，振蕩1min，超聲波提取20min后，加入0.5g氯化鈉，0.5g無水硫酸鎂，2500r/min渦旋振蕩30s，8000r/min離心5min取上清液待凈化;取上述待凈化液5ml，加入C180.05g，PSA0.05g，無水硫酸鎂0.1g，2500r/min渦旋振蕩30s，8000r/min離心2min，上清液過0.45μm有機相濾膜過濾后，進行GC-MS/MS分析。

5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲備液

將糠醛、5-甲基糠醛、5-羥甲基糠醛、苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯用乙腈配制成濃度為2000mg/L的溶液，于4℃保存。

（2）標(biāo)準(zhǔn)液

將儲備液配制成0.01、0.02、0.05、0.1、0.5、1、2、5、10和50mg/L的標(biāo)準(zhǔn)液，進樣分析，以保留時間定性，以峰面積定量。用外標(biāo)法繪制出濃度/峰面積工作曲線做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

二、結(jié)果與討論

1、實驗條件的優(yōu)化

（1）樣品前處理條件的優(yōu)化

①提取溶劑的選擇選用乙酸乙酯、正己烷、乙腈、二氯甲烷、丙酮5種不同極性的溶劑對8種化合物進行萃取實驗。按稱取試樣2g(醬油、牛奶，精確至0.01g)于50mL離心管中，加入10.0mL乙腈，250r/min渦旋，振蕩1min，超聲波提取20min后，加入0.5g氯化鈉，0.5g無水硫酸鎂，2500r/min渦旋振蕩30s，8000r/min離心5min取上清液待凈化;取上述待凈化液5ml，加入C180.05g，PSA0.05g，無水硫酸鎂0.1g，2500r/min渦旋振蕩30s，8000r/min離心2min，上清液過0.45μm有機相濾膜過濾后，進行GC-MS/MS分析。結(jié)果表明，采用乙腈作為提取溶劑時的回收率更高，最終采用乙腈作為提取溶劑，回收率見表2。

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