2.2萃取條件的選擇

2.2.1不同提取方法的比較

對比了索氏提取、超聲提取和加壓溶劑萃取3種不同提取方法的回收率，見圖4.可以看出，加壓溶劑萃取法回收率明顯高于索氏提取和超聲提取法.在整個萃取過程中，加壓溶劑萃取儀器始終處在密閉的高溫、高壓下進行，而高溫和高壓有助于提高氟吡菌胺在溶劑中的溶解度，顯著提高了萃取效率.其次，在密封的條件下減少了揮發(fā)損失，從而也有助于提高萃取效率。

2.2.2萃取溶劑的選擇

萃取溶劑的選擇對目標化合物的提取影響非常大。分別選擇甲醇、乙腈、正己烷、丙酮、正己烷-二氯甲烷(1∶1)和丙酮-二氯甲烷(1∶2)為提取溶劑，固定加熱溫度120℃，載氣壓力120psi，靜態(tài)萃取15min，萃取池淋洗體積70%池體積，氮氣吹掃時間90s，循環(huán)靜態(tài)萃取次數(shù)2次，按照色譜條件進行檢測，考察萃取溶劑對氟吡菌胺回收率的影響，結(jié)果見圖5。

由圖5知，在相同實驗條件下，乙腈的回收率最高，達到了95%～98%，明顯優(yōu)于其他萃取溶劑，因此本試驗選擇乙腈作為萃取溶劑。

2.2.3萃取溶劑的用量

萃取劑乙腈的用量是影響試驗結(jié)果的重要因素之一，試驗對比了乙腈用量分別為5、10、15、20、25、30mL時對氟吡菌胺回收率的影響，結(jié)果見圖6。

1-正己烷；2-甲醇；3-乙腈；4-丙酮；5-正己烷-二氯甲烷；6-丙酮-二氯甲烷

由圖6知，隨著乙腈用量的不斷增加，目標化合物氟吡菌胺的回收率先逐漸升高，后逐漸趨于平衡，乙腈用量在15mL時，氟吡菌胺回收率達到最高值，平均回收率在90%以上.顯然少量的乙腈不能夠?qū)⒛繕宋镔|(zhì)完全的萃取，隨著乙腈用量增加，氟吡菌胺萃取效果達到最優(yōu)，回收率達到最高值，但隨著萃取溶劑用量不斷增加，萃取達到相對動態(tài)平衡，回收率變化不明顯.通過試驗最終確定萃取溶劑乙腈用量最佳為15mL。

2.2.4靜態(tài)萃取時間和萃取壓力的選擇

分別設(shè)定靜態(tài)萃取時間為2、3、5、8、10、12min，考察萃取回收率。圖7顯示，萃取5min時，回收率在90%以上，再延長萃取時間，目標物的回收率基本不變，故靜態(tài)萃取時間選擇5min。分別選擇50、70、100、120和150psi萃取壓力，考察回收率的變化，結(jié)果見圖8.可見，氟吡菌胺的萃取回收率隨著萃取壓力的增加而逐漸提高，在100、120和150psi萃取壓力下，回收率無明顯變化，因此，萃取壓力確定為100psi。

2.3液相色譜和質(zhì)譜分析條件的優(yōu)化

分別考察了甲醇-10mmol乙酸銨+0.1%甲酸水溶液、甲醇-5mmol乙酸銨+0.1%甲酸水溶液、甲醇-水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液和甲醇-0.1%甲酸水溶液為流動相對氟吡菌胺分析的影響，結(jié)果顯示，甲醇-5mmol乙酸銨+0.1%甲酸水溶液為流動相時，目標物峰形最佳，響應(yīng)最靈敏。

文獻報道的氟吡菌胺液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法一般采用電噴霧離子正離子模式，本文中在全掃描模式下對比了正、負離子模式下氟吡菌胺的響應(yīng)，結(jié)果表明，在正離子模式下氟吡菌胺靈敏度更高，因此選擇正離子模式進行分析.在MS/MS模式中，以錐孔電壓48V進行目標物的子離子檢測，以豐度最大(m/z)172.9作為定量離子，以次靈敏響應(yīng)離子m/z364.9作為定性離子，優(yōu)化質(zhì)譜分析參數(shù)見表2。

2.4標準曲線和檢出限

將氟吡菌胺標準儲備溶液用乙腈逐級稀釋成0.025μg/mL、0.050μg/mL、0.125μg/mL、0.250μg/mL、0.500μg/mL標準系列溶液，準確稱取與試樣基質(zhì)相應(yīng)的陰性試樣5g(精確至0.01g)，分別加入標準系列溶液200μL，與試樣同時進行提取，制成最終濃度為5.00ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL標準系列工作溶液。按儀器條件對系列進行測定，在5.00～100ng/mL范圍內(nèi)，濃度值與其對應(yīng)的峰面積呈線性關(guān)系，標準曲線回歸方程為Y=48697X-4711，相關(guān)系數(shù)R2>0.9990，定量限為1.00μg/kg。

2.5精密度和準確度試驗

稱取6份5g樣品，在線性范圍內(nèi)分別加入低、中、高系列濃度分析物，按照前處理過程和儀器條件對6份樣品進行測定，計算相對標準偏差(RSD%)和加標回收率，結(jié)果如表3所示。

2.6樣品測定

隨機抽取三家菜市場，每一菜市場選取2種日常食用蔬菜，分別為白菜、西藍花、西紅柿、黃瓜、芹菜和四季豆，按照本方法的前處理和儀器條件進行分離分析，結(jié)果在上述蔬菜中均未檢測出氟吡菌胺殘留。同時，對種植過程中噴灑了氟吡菌胺農(nóng)藥的芹菜和白菜分別進行殘留量測定，結(jié)果見表4.其中，芹菜和白菜的施藥劑量均為953(a.i.)g/hm2，施藥次數(shù)均為3次，采集樣品時間至最后一次施藥完成后的第7d。

3結(jié)論

本工作建立了以乙腈提取，加壓溶劑萃取-高效液相色譜-三重四級串聯(lián)質(zhì)譜法測定植物源性食品中氟吡菌胺殘留量的方法，提取方法操作簡單，目標化合物損失小，準確度高，且方法線性良好、精密度、準確度均能滿足定量限在1.00μg/kg的檢測分析要求，適用于植物源性食品中氟吡菌胺農(nóng)藥殘留量的檢測。

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