近年來，mRNA技術(shù)被成功地應(yīng)用于新冠病毒疫苗的研發(fā)，今年諾貝爾醫(yī)學(xué)與生理學(xué)獎(jiǎng)也授予了發(fā)明mRNA修飾技術(shù)的兩位科學(xué)家Katalin Karikó與Drew Weissman。而被稱為mRNA2.0時(shí)代的環(huán)狀mRNA（circRNA）技術(shù)更是引發(fā)了廣泛關(guān)注，其具有生產(chǎn)成本低、蛋白水平表達(dá)高的優(yōu)勢，在免疫細(xì)胞治療領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用潛力。

CAR-T細(xì)胞療法在治療血液腫瘤方面取得了巨大成功，目前已有10種治療B細(xì)胞腫瘤與多發(fā)性骨髓瘤的CAR-T產(chǎn)品獲得NMPA與FDA批準(zhǔn)上市。與CAR-T細(xì)胞類似，T細(xì)胞受體工程化T細(xì)胞（TCR-T）也是一類經(jīng)工程化改造的T細(xì)胞。不同于CAR-T細(xì)胞主要識別細(xì)胞表面抗原，TCR-T細(xì)胞可以靶向細(xì)胞內(nèi)部抗原，在抗病毒與抗腫瘤免疫治療領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景，有望成為繼CAR-T細(xì)胞之后，又一類重磅工程化T細(xì)胞藥物。鑒于HLA基因的多樣性及TCR受體庫的復(fù)雜性，篩選抗原特異性的TCR受體依然極具挑戰(zhàn)性。

近日，上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一人民醫(yī)院/上海市第一人民醫(yī)院張巖與宋獻(xiàn)民研究團(tuán)隊(duì)聯(lián)合蘇州科銳邁德生物醫(yī)藥科技公司左熾健團(tuán)隊(duì)，在線發(fā)表了最新研究論文。該研究首次報(bào)道了基于環(huán)狀mRNA技術(shù)的TCR-T細(xì)胞療法，為臨床上造血干細(xì)胞移植后人巨細(xì)胞病毒（CMV）感染提供新的、更為安全有效的免疫治療策略。

如何有效擴(kuò)增抗原特異性T淋巴細(xì)胞并獲得抗原特異性TCR序列，是研發(fā)TCR-T細(xì)胞的關(guān)鍵。蘇州生物醫(yī)藥科技公司之前的研究表明，環(huán)狀mRNA （circular mRNA, cmRNA）能夠顯著延長外源基因在細(xì)胞中的表達(dá)時(shí)長。本項(xiàng)研究中，研究團(tuán)隊(duì)首先利用環(huán)狀mRNA技術(shù)，在單核細(xì)胞分化的樹突狀細(xì)胞（moDCs）中表達(dá)CMV-pp65抗原，檢測是否能夠提供更為持久的抗原刺激信號，促進(jìn)抗原特異性的活化和增殖。研究結(jié)果表明：與線性mRNA相比，轉(zhuǎn)染了編碼CMV-pp65 抗原的環(huán)狀RNA的moDCs細(xì)胞，能更加持久地提供抗原信號，更加高效地激活和擴(kuò)增CMV-pp65特異性T細(xì)胞，表明基于環(huán)狀mRNA技術(shù)的抗原遞呈新策略，能夠顯著提高TCR的篩選效率，在開發(fā)抗原特異性T細(xì)胞（尤其是含量較低的抗原特異性T細(xì)胞）方面具有巨大優(yōu)勢。

此外，之前有文獻(xiàn)報(bào)道線狀mRNA編碼的TCR基因只能在原代T細(xì)胞中表達(dá)48-72小時(shí)。研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)而對環(huán)狀mRNA編碼的外源TCR基因在原代T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)時(shí)長進(jìn)行了測試，發(fā)現(xiàn)環(huán)狀mRNA技術(shù)能夠顯著提升TCR基因在人原代T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)時(shí)長。在電轉(zhuǎn)后7天與11天，依然分別有約80%與50%的T細(xì)胞表達(dá)外源TCR受體。研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步對基于環(huán)狀mRNA技術(shù)的cm-pp65-TCR-T細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的殺傷功能進(jìn)行了測試，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩周輸注一次cm-pp65-TCR-T細(xì)胞，即可有效清除表達(dá)CMV-pp65抗原的靶細(xì)胞。

數(shù)據(jù)顯示，我國人群CMV病毒感染率超過95%，多數(shù)呈現(xiàn)潛伏感染狀態(tài)。然而，臨床上接受造血干細(xì)胞移植術(shù)的患者，由于經(jīng)過術(shù)前清髓預(yù)處理，呈現(xiàn)暫時(shí)的T細(xì)胞免疫缺陷，因而患者在移植后2-3個(gè)月CMV病毒易發(fā)生再激活，發(fā)生CMV血癥甚至CMV肺炎。盡管來特莫韋等抗病毒藥物顯著降低了造血干細(xì)胞移植后患者CMV的再激活，但對于部分患者而言CMV病毒再激活依然可能會(huì)危及患者生命。

該研究將為這部分患者提供新的治療手段，因而具有重要的臨床研究意義。多數(shù)造血干細(xì)胞移植患者在術(shù)后數(shù)月后，體內(nèi)會(huì)重建針對CMV病毒的T細(xì)胞免疫。基于環(huán)狀mRNA技術(shù)的TCR-T細(xì)胞，由于TCR基因不會(huì)整合到基因組，沒有潛在的致瘤風(fēng)險(xiǎn)，因而具有良好的安全性。此外，如果采用造血干細(xì)胞移植供者來源的T淋巴細(xì)胞制備cm-pp65-TCR-T細(xì)胞，回輸患者后不僅可以治療CMV病毒感染，而且能夠增強(qiáng)“移植物抗腫瘤效應(yīng)”（GVL），促進(jìn)供者造血干細(xì)胞的植入。目前，市一醫(yī)院血液科即將在本項(xiàng)研究基礎(chǔ)上，開展研究者發(fā)起的臨床研究（IIT）。

綜上所述，該研究是首次將環(huán)狀mRNA技術(shù)應(yīng)用于TCR-T細(xì)胞的研發(fā)與制備，不僅為造血干細(xì)胞移植后CMV感染的免疫治療提供新的策略，也為其它抗病毒或抗腫瘤TCR-T療法提供新的思路。

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