另以不摻分泌物的PDA平板為對照，通過分泌物摻入和菌餅接種培養(yǎng)，觀察不同霉菌在PDA平板上的生長情況（圖1），測量并計算摻入分泌物對霉菌平板生長的抑制效果（表1）。
 

由表1和圖1可以清楚地看出，YP1外分泌物對各種供試霉菌具有非常顯著的抑制效果，對酵母也有很好的抑制效果，其中白地霉的生物學(xué)特征介于普通霉菌和酵母菌之間，繁殖方式為裂殖，形成節(jié)孢子，釀酒酵母為芽殖，不形成孢子。由表1可知，霉菌在添加分泌物的PDA平板上菌落生長受到顯著抑制，可以肯定的一個原因是孢子萌發(fā)受到了抑制，因為霉菌主要依靠形形色色的孢子進行繁殖擴張，孢子數(shù)量龐大，孢子萌發(fā)受到抑制，自然會大大抑制其菌落生長速度，但霉菌的菌絲生長是否也受到了分泌物的抑制，尚無法判定。

為搞清楚真菌的菌絲生長是否受到分泌物的抑制，我們又對一些植物病原真菌和食用菌進行了平板培養(yǎng)。這些真菌有個共同特點，即其菌絲生長和孢子形成時間間隔明顯，只有菌絲體生長到一定階段才會有孢子的形成，尤其是食用菌，在平板培養(yǎng)條件下只有菌絲體營養(yǎng)生長，無法形成孢子，平板培養(yǎng)的結(jié)果見表2。表2清楚地表明，產(chǎn)孢越早越多的真菌菌落生長受到分泌物的抑制越嚴重，產(chǎn)孢越晚越少的真菌菌落生長受到分泌物的抑制越輕微，而在平板培養(yǎng)中不形成孢子的食用菌菌落的生長不受分泌物的影響。以上表明，YP1外分泌物對真菌菌絲的生長沒有影響，分泌物抑制真菌生長是通過抑制孢子萌發(fā)實現(xiàn)的。

5、拮抗菌株

YP1外分泌物的化學(xué)組成分析經(jīng)高壓液相色譜分離和質(zhì)譜儀分析，共分離獲得10種組份（圖2），其中鑒定出3種組份，未鑒定出的組份有7種（表3）。鑒定出的三個組份均為由C、H、N、O組成的富N有機化合物（分子中含7～8個N原子），未鑒定出的7種化合物很可能屬于新化合物。

黑附球菌本身是一種腐生真菌，廣泛存在于空氣、土壤及植物體表面，黑附球菌不同菌株之間存在著強烈的多樣性，這種多樣性不僅體現(xiàn)在不同的菌株分離物表型的多樣性上，還體現(xiàn)在不同的菌株可以產(chǎn)生不同種類的次生代謝產(chǎn)物，在工業(yè)、醫(yī)藥和生物控制領(lǐng)域具有很大的應(yīng)用潛力。然而，迄今報道的由黑附球菌菌株產(chǎn)生的廣譜抗真菌物質(zhì)僅有黃柄曲菌素，其他菌株產(chǎn)生的抗菌化合物都只能對少數(shù)種類的真菌產(chǎn)生拮抗作用，比如Ferdinand等（2013）從可可樹中分離的一株內(nèi)生Epicoccum菌株發(fā)酵液產(chǎn)生三種聚氧聚酮化合物，epicolactone和epicoccolideA與B，由C、H、O三種元素組成，對終極腐霉、螺殼狀絲囊霉、立枯絲核菌三種植物病原真菌的菌絲體生長具有顯著的抑制效果。

三、討論

本研究中獲得的YP1菌株外分泌物具有顯著的抗霉菌活性，同時對多孢子植物病原真菌也具有很好的拮抗效果，其抑制多孢子真菌的主要機制是抑制孢子萌發(fā)，在果蔬、食品的保鮮防腐以及植物病害的防治領(lǐng)域顯示出很好的應(yīng)用潛力。YP1菌株外分泌物由多達10種化學(xué)成分組成，再一次證實了黑附球菌個體菌株之間存在著強烈的代謝多樣性，是目前發(fā)現(xiàn)的次生代謝產(chǎn)物最為豐富的真菌種類之一，是難得的微生物天然產(chǎn)物資源，在工業(yè)、醫(yī)藥和生物控制領(lǐng)域具有很大的應(yīng)用潛力，成為相關(guān)研究的熱點。本項目組下一步的重點研究工作是對YP1菌株外分泌物各組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)進行精確解析，并進一步優(yōu)化發(fā)酵條件，提高分泌物發(fā)酵產(chǎn)量，為實際應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

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