（8）果蠅抗氧化基因mRNA表達(dá)水平的測定

取-80⁰C保存的果蠅，Trizol法提取mRNA，反轉(zhuǎn)錄得cDNA，-80⁰C備用。Realtime-PCR法檢測測定SOD1、SOD2、CAT、MTHmRNA表達(dá)水平。果蠅抗氧化基因?qū)崟r定量PCR引物見表1。

3、數(shù)據(jù)處理

本實驗采用IBMSPSSStatistics22軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析。其中，兩兩比較時采用單因素方差分析，多重比較時采用Duncans多重檢驗。實驗結(jié)果以“均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差（M±SD）”表示。P＜0.05表示兩組之間存在顯著性差異，P＜0.01表示兩組之間存在極顯著性差異。

二、結(jié)果與分析

1、褐變黑枸杞中總黃酮、總酚含量和褐變指數(shù)酚類、黃酮類和蛋白黑素被認(rèn)為是主要的生物活性化合物，在食品中具有抗氧化性能。據(jù)報道，這些抗氧化化合物具有很強的自由基清除能力，對自由基誘導(dǎo)的疾病有重要作用。由表3可知，紅枸杞和褐變黑枸杞中的酚類濃度為0.890±0.008mgGAE/mL和1.303±0.001mgGAE/mL。紅枸杞和褐變黑枸杞中黃酮類化合物的含量分別為1.588±0.225mgRE/mL和2.300±0.256mgRE/mL。與紅枸杞相比，褐變黑枸杞總酚和總黃酮含量顯著性增加（P＜0.05）。結(jié)果表明，高溫高濕處理可導(dǎo)致美拉德反應(yīng)過程中總酚和總黃酮的增加。

從表3可以看出，黑素類化合物在褐變黑枸杞中的褐變指數(shù)（420nm）為1.857+0.006。褐變黑枸杞的褐變指數(shù)明顯高于紅枸杞（P＜0.05）。研究表明，美拉德反應(yīng)能產(chǎn)生高分子量的黑素。

2、褐變黑枸杞中主要的酚類物質(zhì)

由表4可知，高效液相色譜檢測了7種酚類化合物，主要包括兒茶素、咖啡酸、P-香豆酸、蘆丁、阿魏酸、槲皮素、綠原酸。其中對香豆酸濃度為8.76±0.81mg/g，其次為兒茶素水合物（5.67+0.21mg/g），這兩種化合物具有抗氧化活性，對氧化損傷具有保護作用。與褐變黑枸杞相比，紅枸杞中各酚類含量低于褐變黑枸杞。結(jié)果表明，P-香豆酸是褐變黑枸杞中酚類化合物的主要成分。

3、褐變黑枸杞對果蠅壽命的影響

由圖1和表5可知，與正常組相比，飼喂枸杞后，各劑量組果蠅的平均壽命、最高壽命及半數(shù)死亡時間均有明顯的延長，說明枸杞有一定的抗氧化作用，對果蠅壽命有一定的延長作用。其中，與紅枸杞低劑量組相比，12mg/mL褐變黑枸杞組雄、雌性果蠅的平均壽命及最高壽命均顯著延長（P＜0.05），說明褐變黑枸杞可以有效延長果蠅的壽命，延緩果蠅衰老，且呈現(xiàn)良好的劑量效應(yīng)關(guān)系。

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