2.3 統(tǒng)計分析方法比較

利用SIMCA14.1軟件對測定的大豆水溶性蛋白質(zhì)δ¹³C、δ¹⁵N、δ¹⁸O和δ²H值進行多元變量統(tǒng)計分析，分別建立PCA和OPLS–DA兩種統(tǒng)計分析方法的大豆產(chǎn)地溯源鑒別模型，如圖5和圖6所示（橢圓形區(qū)域為HotellingT2檢驗，95%置信區(qū)間）。

PCA溯源鑒定模型結(jié)果顯示，利用大豆水溶性蛋白質(zhì)中的δ¹³C、δ¹⁵N、δ¹⁸O和δ²H值可區(qū)分四個國家的大豆樣品。構(gòu)建OPLS–DA大豆產(chǎn)地溯源鑒定模型獲得大豆中水溶性蛋白質(zhì)的4個變量δ¹³C、δ¹⁵N、δ¹⁸O和δ²H對產(chǎn)地區(qū)分模型的貢獻度用VIP值評定。結(jié)果表明，δ¹⁵N在產(chǎn)地溯源模型中對產(chǎn)地溯源的貢獻最大，其次是δ²H和δ¹⁸O，δ¹³C的貢獻最低，其VIP值依次為1.069，1.045，1.035，0.834。對比分析大豆產(chǎn)地溯源的兩種統(tǒng)計分析方法的模型鑒定準確率，結(jié)果表明，OPLS–DA模型分析結(jié)果顯著，建立的識別模型對美國、巴西和阿根廷產(chǎn)大豆的識別準確率均為100%，對加拿大產(chǎn)大豆的識別準確率為90%；PCA識別模型對美國和阿根廷產(chǎn)大豆的識別準確率均為80%，對巴西和加拿大產(chǎn)大豆的識別準確率均為90%，因此最終選擇OPLS–DA統(tǒng)計方法建立的模型進行大豆產(chǎn)地溯源識別分析。

2.4 大豆產(chǎn)地鑒定模型建立

分別對美國與其它國家大豆水溶性蛋白質(zhì)δ¹³C、δ¹⁵N、δ¹⁸O和δ²H值采用OPLS–DA建立兩兩國家同位素產(chǎn)地溯源鑒定模型，結(jié)果如圖7～圖9所示（橢圓形區(qū)域為HotellingT2檢驗，95%置信區(qū)間）。

圖7～圖9結(jié)果表明，所建立的同位素產(chǎn)地溯源鑒定模型識別準確率達到100%，應(yīng)用該方法可準確鑒別美國與其他國家大豆產(chǎn)地。

2.5 大豆產(chǎn)地鑒定模型驗證

為了進一步驗證上述模型的可靠性，選用四個國家各10份非建模大豆樣品，提取其中的水溶性蛋白質(zhì)，測定δ¹³C、δ¹⁵N、δ¹⁸O和δ²H值，分別帶入已建立的OPLS–DA兩兩國家識別模型進行驗證，結(jié)果見表2。盲樣驗證結(jié)果表明，除了加拿大產(chǎn)大豆中有1份被誤判為美國產(chǎn)外，其他3個國家盲樣均可準確識別，識別準確率為100%。

3 結(jié)語

建立了基于EA–IRMS測定大豆水溶性蛋白質(zhì)δ¹³C、δ¹⁵N、δ¹⁸O和δ²H的OPLS–DA大豆產(chǎn)地溯源模型。結(jié)果表明，美國與加拿大、阿根廷、巴西產(chǎn)的大豆在建立的兩兩識別模型中可準確鑒別，識別準確率均可達100%。該方法和所構(gòu)建的模型準確可靠，可有效防止和打擊特定國家的大豆通過第三國轉(zhuǎn)運出口至我國的非法行為，維護國家利益。

相關(guān)鏈接：蛋白質(zhì)，大豆，氮同位素

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