因此，本實驗采用AtlantisT3色譜柱，以2.5mmol/L乙酸銨甲醇溶液-2.5mmol/L乙酸銨水溶液進行梯度洗脫。圖3可見15種物質(zhì)在12min內(nèi)全部流出，日標化合物保留時間適中，峰面積、信噪比較高，雜峰響應(yīng)較小；在空白基質(zhì)中添加日標化合物，在上述檢測條件下，譜圖無干擾雜峰，13種PFCs響應(yīng)好。隨碳鏈的增加，PFCs在C₁₈柱上的保留逐漸增強，同一碳鏈數(shù)全氟磺酸類化合物保留強于全氟羧酸類化合物。PFBA最先流出，PFDoS最后流出。

2.1.2質(zhì)譜條件選擇

PFCs化學結(jié)構(gòu)中具有羧基或磺酸基，因此采用負離子模式檢測。本實驗采用流動注射進樣方式，分別對5μg/mL標準溶液進行m/z200-1000ESI一級全掃捕，南實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PFCs主要以電離后失去羥基上氫原子[M-H]^-最強，確定其為準分子離子，并優(yōu)化噴霧電壓、蒸汽溫度、離子傳輸管溫度以獲得較強的響應(yīng)值。接下來，以其作為母離子進行子離子掃描并優(yōu)化碰撞能量，確定定性離子和定量離子。在實驗過程中，PFCAs生成[M-H-44]^-子離子，推斷是PFCAs發(fā)生中性丟失CO₂產(chǎn)生；PFSAs生成m/z99和m/z80子離子，推斷是PFSAs斷裂生成[FSO₃]和[SO₃]^-。本次實驗選是PFSAs斷裂生成[FSO₃]和[SO₃]。本次實驗選取豐度較高且干擾較少的子離子[M-H-44]-和[SO₃]^-分別作為PFCAs和PFSAs的定量離子。

2.2前處理優(yōu)化

針對動物源性食品(肝臟、腎臟、肌肉)基質(zhì)復雜、含有大量蛋白質(zhì)及內(nèi)源性物質(zhì)等特點，本研究采用改良的QuEChERS樣品前處理方法，酸化乙腈提取，C₁₈、PSA和GCB混合吸附劑分散固相蒂取凈化，減少基質(zhì)巾雜質(zhì)干擾、提高回收率。

2.2.1提取溶劑優(yōu)化

已報道的文獻中采用乙腈、鹽酸-乙腈作為提取溶劑提取動物源性食品的肌肉和肝臟基質(zhì)中的PFCs。鑒于乙腈是常用的動物源性食品有機提取溶劑，而且PFCs是酸性化合物，在酸性環(huán)境下呈非解離狀態(tài)，有利于進入有機相，所以本實驗選擇鹽酸-乙腈作為提取溶劑。

同時，考察了0.05％、0.1％、0.2％、0.3％網(wǎng)個不同濃度鹽酸-乙腈對動物源性食品中13種PFCs的提取同收率。圖4結(jié)果表明，在0.05％～0.3％范同內(nèi)，9種PFCAs的回收率基本是逐漸增加趨勢，4種勢，0.1％、0.2％、0.3％鹽酸-乙腈的回收率均在合理范圍內(nèi)，分別為76.3％～114.6％、95.3％～119.4％、85.8％～118.9％。上述三個濃度都是適宜的提取濃度，但0.2％鹽酸-乙腈的回收率較集中，分布在95％～120％之問，最低回收率95.3％均高于其他兩個濃度；同時為避免增加鹽酸用量對后續(xù)分析產(chǎn)生十擾，所以選擇0.2％鹽酸-乙腈作為提取溶劑。在提取過程中，0.2％鹽酸-乙腈使樣品基質(zhì)中大量蛋白質(zhì)變性形成沉淀，并通過高速離心去除。但含脂量較高的樣品進行蛋白沉淀時，易將樣品中的脂肪和水溶性雜質(zhì)也提取出來，造成提取液混濁，可能對LC-MS/MS分析產(chǎn)生基質(zhì)干擾，因此對提取液要進一步凈化。

2.2.2凈化方式優(yōu)化

QuEChERS方法是使用分散固相葦取技術(shù)凈化，通過將固相吸附劑直接加入到樣品提取液中來達到吸附干擾物質(zhì)的目的。動物源性食品中存在蛋白質(zhì)、碳水化合物、色素、脂肪、甾醇等物質(zhì)，可以通過采用不同類型吸附劑達到凈化效果。已有文獻選用C₁₈、PSA、GCB三種吸附劑單一或不同配比進行PFCs凈化，但存在樣品基質(zhì)種類較少或檢測項目少等缺點。本實驗比較了3種吸附劑單一和混合方式對動物源性食品的肝臟、腎臟和肌肉中多種PFCs的凈化效果及回收率。

2.2.2.1C₁₈優(yōu)化

C₁₈主要吸附脂肪和酯類等非極性共萃物。通過在空白樣品中添加目標物，做2μg/kg添加濃度3個平行，比較40～100mg單一吸附劑C₁₈對PFCs回收率的影響，發(fā)現(xiàn)隨著C₁₈用量由40mg增加到80mg，同收率亦增加，在80mg達到88.4％～116.3％(見圖5)；由80mg增加到100mg，大多數(shù)PFCAs回收率基本保持不變，4種PFSAs和PFHpA、PFDA回收率有所下降，但13種PFCs回收率仍處于85.5％～118.0％的合理范圍(見圖5)。因此采用合理同收率的最小用量80mg。但凈化后的溶液有色素殘留，會污染色涪柱及檢測儀器，需要進一步去除色素。

2.2.2.2PSA優(yōu)化

PSA是一種弱陰離子交換劑，可以吸附碳水化合物、有機酸、少量色素等極性干擾物質(zhì)。在空白樣品中添加日標物，做2μg/kg添加濃度3個平行，在80mgC₁₈凈化基礎(chǔ)上，同時加入80～140mgPSA觀察PFCs的叫收率變化情況。由圖6可以得知隨著PSA用量的增加，PFCAs回收率呈先上升后下降趨勢，并在100、120mg時回收率達到合理最大值；PFSAs同收率呈下降趨勢，80、100mg同收率是83.9％～92.1％。綜合考慮，選擇100mgPSA為最佳用量。但凈化后的溶液有色素殘留，需要加入GCB去除。

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