2、提取時(shí)間的考察

參考國(guó)標(biāo)GB5009：28-2016一般性食品中樣品提取時(shí)間，本試驗(yàn)對(duì)不同類(lèi)別的糕點(diǎn)進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)來(lái)考察樣品提取時(shí)間對(duì)目標(biāo)成分提取效率的影響，考察的提取時(shí)間分別為5min、10min、20min、30min、40min、50min、60min，稱(chēng)取糕點(diǎn)、月餅、辣條樣品各3份，精密加入混合標(biāo)準(zhǔn)使用液2.0mL，上機(jī)測(cè)定，得到4組分在不同提取時(shí)間的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果顯示，超聲提取10min，4種目標(biāo)組分的數(shù)值基本達(dá)到穩(wěn)定，提取時(shí)間為20min所得含量最高，本次試驗(yàn)最終選擇超聲時(shí)間為20min。
 

3、蛋白沉淀劑加入量的考察

參考相關(guān)文獻(xiàn)，本次試驗(yàn)考察蛋白沉淀劑(亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液)加入量對(duì)不同類(lèi)別糕點(diǎn)在4組分中的影響，蛋白沉淀劑加入量分別為0mL、lmL、2mL、3mL、5mL，再沉淀1mL，因找不到同時(shí)含有這4組分的陽(yáng)性樣品，故試驗(yàn)采用的是陰性樣品加標(biāo)試驗(yàn)進(jìn)行考察，稱(chēng)取糕點(diǎn)、月餅、辣條樣品各3份，精密加入混合標(biāo)準(zhǔn)使用液2.0mL，按樣品(無(wú)奶油蛋糕或面包、辣條、月餅)2g于50mL具塞離心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超聲20min，冷卻至室溫，加219g/L亞鐵氰化鉀、106g/L乙酸鋅溶液各2mL，渦旋混勻，于10000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，殘?jiān)偬崛∫淮?，合?次濾液，定容至刻度。

取15mL提取液，加10mL正己烷，渦旋5min，離心后，吸取下層過(guò)濾上機(jī)分析制備供試品溶液，上機(jī)測(cè)定，計(jì)算4組分在不同蛋白沉淀劑加入量所得含量，從表中可以看出，沉淀劑加入量對(duì)月餅影響最大，對(duì)辣條影響次之，對(duì)糕點(diǎn)影響最小，沉淀劑以加入各2mL為宜，對(duì)于加入沉淀劑后的提取液還渾濁的樣品，可以在提取液中再加入各lmL沉淀劑，不會(huì)對(duì)結(jié)果造成顯著差異。

4、凈化方式的考察

（1）正己烷凈化方式的考察

本次試驗(yàn)采用正己烷萃取1次、正己烷萃取2次、PRiMeI-ILBSPE柱三種凈化方式對(duì)不同類(lèi)別糕點(diǎn)4組分加標(biāo)含量測(cè)定結(jié)果的影響，蛋白沉淀劑(亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液)加入量對(duì)不同類(lèi)別糕點(diǎn)在4組分中的影響，蛋白沉淀劑加入量分別為0mL、lmL、2mL、3mL、5mL，再沉淀1mL，因找不到同時(shí)含有這4組分的陽(yáng)性樣品，故試驗(yàn)采用的是陰性樣品加標(biāo)試驗(yàn)進(jìn)行考察，稱(chēng)取糕點(diǎn)、月餅、辣條樣品各3份，精密加入混合標(biāo)準(zhǔn)使用液2.0mL，按樣品(無(wú)奶油蛋糕或面包、辣條、月餅)2g于50mL具塞離心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超聲20min，冷卻至室溫，加219g/L亞鐵氰化鉀、106g/L乙酸鋅溶液各2mL，渦旋混勻，于10000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，殘?jiān)偬崛∫淮?，合?次濾液，定容至刻度。

取15mL提取液，加10mL正己烷，渦旋5min，離心后，吸取下層過(guò)濾上機(jī)分析制備供試品溶液，上機(jī)測(cè)定，計(jì)算4組分在不同蛋白沉淀劑加入量所得含量，從表中可以看出，沉淀劑加入量對(duì)月餅影響最大，對(duì)辣條影響次之，對(duì)糕點(diǎn)影響最小，沉淀劑以加入各2mL為宜，對(duì)于加入沉淀劑后的提取液還渾濁的樣品，可以在提取液中再加入各lmL沉淀劑，不會(huì)對(duì)結(jié)果造成顯著差異。上機(jī)測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖2，對(duì)大部分樣品而言，正己烷萃取1次可降低樣品基質(zhì)效應(yīng)，使樣品檢出含量變大，正己烷萃取2次，則會(huì)帶走目標(biāo)物質(zhì)，PRiMeHLB小柱，對(duì)目標(biāo)組分存在吸附，試驗(yàn)最終選擇正己烷提取1次。

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