應用網(wǎng)絡藥理學方法及分子對接技術探析逍遙散治療肝郁脾虛型抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良的作用機制，為中藥“異病同治”科學內(nèi)涵的詮釋提供理論依據(jù)。利用中藥數(shù)據(jù)庫（traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform, TCMSP）獲取和篩選逍遙散的活性成分，并將其與現(xiàn)有治療上述3種疾病的藥物進行主成分分析（principal component analysis, PCA）判斷其生物活性；并結(jié)合Genecard數(shù)據(jù)庫、TTD數(shù)據(jù)庫、CTD數(shù)據(jù)庫和DrugBank數(shù)據(jù)庫獲取疾病靶點得到逍遙散治療抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良的作用靶點。

采用Cytoscape軟件繪制逍遙散“異病同治”的“單味藥-活性成分-共同靶點”網(wǎng)絡圖尋找核心靶點，對共有靶點進行kyoto encyclopedia of genes and genomes（KEGG）通路分析和gene ontology（GO）富集分析。該研究收集得到逍遙散活性成分121個，逍遙散“異病同治”共有靶點38個，關鍵生物通路包括糖尿病并發(fā)癥中的advanced glycation and products（AGEs）-receptor for advanced glycation and products（RAGE）信號通路、HIF-1信號通路以及癌癥相關通路等。逍遙散“異病同治”抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良的關鍵靶點為IL-6、IL-4和TNF等，關鍵活性成分有山柰酚、槲皮素和蘆薈大黃素等。最后，分子對接結(jié)果表明，關鍵活性成分與靶點之間具有很強的親和力，驗證了實驗結(jié)果。

逍遙散治療肝郁脾虛型疾病可能是通過減少炎癥反應發(fā)揮作用。研究結(jié)果為闡釋中藥復方“異病同治”科學內(nèi)涵提供了新的思路與方法，也將為深入了解逍遙散效應機制、探索其新的臨床應用提供理論依據(jù)。

“異病同治”始于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，確立于《傷寒雜病論》，在臨床診斷及治療中發(fā)揮著重要的指導作用。“異病同治”是指不同疾病，在其發(fā)展過程中，由于出現(xiàn)了相同病機，因而可采用同一種治療的法則。這一理論基礎是“證同治亦同”，而證則是最終選擇治療方法的關鍵點。“異病同治”也體現(xiàn)了中藥及其方劑多成分、多靶點、多途徑的作用特點。“異病同治”科學內(nèi)涵的闡釋是中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容之一。

抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良是臨床常見疾病。這三種疾病最常見的中醫(yī)證候為肝郁脾虛證。首先，肝主疏泄，主藏血；脾主運化，主生血和統(tǒng)血，兩者共主氣機運行。若情志不遂，久郁傷肝，憂思氣結(jié)，氣機凝滯，阻滯于乳絡，引發(fā)乳房疼痛；脾主運化，主統(tǒng)血，若思慮過尤，導致肝脾兩傷，運化失司，脾不統(tǒng)血，血溢脈外而成瘀。再者，脾氣虛弱則不能運化水谷，故出現(xiàn)食欲減退，可進一步影響脾胃的納運機能，進而腹瀉、厭食；脾主升清，將水谷精微上輸于心、腦等以榮養(yǎng)之，脾虛不能升清，故出現(xiàn)情緒低落、興趣缺乏等大腦能量低下癥狀。由此可見，這3種疾病的發(fā)生、發(fā)展相互關聯(lián)、相互影響。但目前尚未見對這3種疾病的共同發(fā)病機制以及藥物“異病同治”的作用機制的研究報道。

經(jīng)典名方逍遙散出自《太平惠民和劑局方》，由柴胡、白術、白芍、薄荷、當歸、茯苓、甘草和生姜8味藥組成，具有疏肝解郁、養(yǎng)血柔肝止痛之功效，主治肝郁血虛而致兩肋作痛，頭痛目眩，口燥咽干，神疲食少，乳房作脹，脈弦而虛者?，F(xiàn)代藥理實驗和臨床研究表明，逍遙散在治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)（如抑郁癥）、消化系統(tǒng)（如功能性消化不良）、婦科（如乳腺增生）、內(nèi)科等疾病上均有確切的療效 ，體現(xiàn)了該方“異病同治”的特點。

網(wǎng)絡藥理學是在系統(tǒng)生物學與多向藥理學的基礎上提出的一種新思想、新策略，以中藥成分、靶點與疾病間相互作用的整體性和系統(tǒng)性為切入點，系統(tǒng)地觀察藥物的作用機制?；谥兴帞?shù)據(jù)庫、靶標預測技術、網(wǎng)絡分析平臺的網(wǎng)絡藥理學研究模式與中藥及其復方的作用特點相符合，有助于中藥 “異病同治”科學內(nèi)涵的闡釋。

本研究應用網(wǎng)絡藥理學方法研究抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良等3種疾病的發(fā)病機制，以及逍遙散“異病同治”的作用機制。首先，通過PCA分析判斷逍遙散化學成分的生物活性。然后，構建“單味藥-活性成分-共有靶點”網(wǎng)絡，尋找逍遙散“異病同治”的關鍵活性成分和靶點，并對其進行KEGG通路富集分析和GO富集分析。最后，將關鍵活性成分與對應靶點進行分子對接驗證。研究結(jié)果將為中藥復方“異病同治”科學內(nèi)涵的詮釋提供新的研究思路與方法，也將為深入了解逍遙散效應機制，探索其新的臨床應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫及軟件

中藥系統(tǒng)藥理學數(shù)據(jù)庫和分析平臺TCMSP（http://lsp.nwu.edu.cn./tcmsp.php）；Uniprot數(shù)據(jù)庫（http://www.uniprot.org/）；GeneCards（https://genecards.weizmann.ac.il/v3/）數(shù)據(jù)庫；TTD（http://bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/）數(shù)據(jù)庫；CTD（http://ctdbase.org/）數(shù)據(jù)庫；DrugBank（https://www.drugbank.ca/）數(shù)據(jù)庫；Metascape （https://metascape.org/gp/index.html#/main/step1）數(shù)據(jù)庫；Cytoscape 3.7.1軟件；PubChem（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pccompound）數(shù)據(jù)庫；Autodock 軟件；PyMOL 軟件。

1.2 逍遙散化學成分及靶點的搜尋

運用中藥系統(tǒng)藥理學數(shù)據(jù)庫和分析平臺TCMSP收集逍遙散方中8味藥—白芍、白術、薄荷、柴胡、甘草、茯苓、當歸和生姜的化學成分，同時參考文獻查找逍遙散的化學成分。根據(jù)TCMSP數(shù)據(jù)庫中藥物動力學（absorption and distribution and metabolism and excretion, ADME）參數(shù)，以口服生物利用度（oral bioavailability, OB）≥30%和類藥性指數(shù)（drug like index, DL）≥0.18為條件 ，對收集的化學成分進行篩選，并記錄候選活性成分的分子量（molecular weight，MW）、辛醇-水比例（A log P）、血腦屏障（blood-brain barrier，BBB）以及Caco-2細胞滲透性（Caco-2）參數(shù)，以便于后續(xù)分析。利用TCMSP數(shù)據(jù)庫檢索候選活性成分的靶點，將整理搜集到的靶點導入Uniprot數(shù)據(jù)庫（http://www.uniprot.org/）對搜集篩選得到的靶點蛋白與基因進行篩選和校正，選擇物種為“human”，剔除非人源靶點，并將所有的基因校正為其官方名稱（office gene symbol）。

1.3 候選化學成分的活性評價

記錄候選活性成分的MW、AlogP、BBB以及CaCo-2參數(shù)。利用DrugBank（https://www.drugbank.ca/）數(shù)據(jù)庫查找現(xiàn)有的治療抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良的藥物，并記錄每一個藥物的MW、AlogP、BBB以及Caco-2。將搜尋到的逍遙散的活性成分與現(xiàn)有的治療抑郁癥、乳腺增生和功能性消化不良的藥物進行主成分分析PCA分析，預測逍遙散化學成分的類藥性。

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