2.3EPI數(shù)據(jù)庫的建立

將獲得的30種化合物增強(qiáng)型二級(jí)碎片離子（EPI）質(zhì)譜圖，與數(shù)據(jù)處理軟件Analyst相連接，導(dǎo)入每種化合物的EPI圖譜并編輯相應(yīng)的化合物名稱、CAS登記號(hào)、碎片離子信息（精確質(zhì)量、化學(xué)式）等信息，形成30種目標(biāo)化合物的EPT數(shù)據(jù)庫，信息詳見表2。此數(shù)據(jù)庫中每種目標(biāo)化合物都有低、中、高三種能量疊加形成的EPI質(zhì)譜圖，該質(zhì)譜圖中二級(jí)碎片離子的響應(yīng)為三種能量下響應(yīng)的平均值，因此準(zhǔn)確性更高。EPI質(zhì)譜圖碎片信息豐富，實(shí)現(xiàn)了無需標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，也可對(duì)樣品中是否含有30種違禁添加藥品進(jìn)行搜庫篩查，全面確證。

2.4方法檢出限、定量限、線性關(guān)系及基質(zhì)效應(yīng)考察結(jié)果

分別用空白片劑、顆粒劑和膠囊將片劑、顆粒劑和膠囊（內(nèi)容物）樣品細(xì)致研磨，得到均質(zhì)樣品后稱量，稱取0.1000g左右樣品于100mL容量瓶中，加入甲醇適量，超聲提取30min，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，靜置，取上清液經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾，取濾液待測(cè)。若陽性樣品濃度超出線性范圍則用甲醇按一定比例稀釋后再測(cè)。

制作空白基質(zhì)溶液，將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制：將30種違禁添加藥物分別稱取約10mg，置于10mL容量瓶中，11種那非類標(biāo)準(zhǔn)品中加入一定量的乙腈超聲溶解后定容，其余標(biāo)準(zhǔn)品加入一定量甲醇超聲溶解后定容，均配制成濃度約為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，并保存于-4℃冰箱中。

色譜柱：PhenomenexKjneLex-C18色譜柱，規(guī)格50mm×2.1mm，2.6μm；柱溫：40℃；流動(dòng)相：A為乙腈，B為10mmol/L乙酸銨水溶液；梯度洗脫：0～7min，10％A～90％A，7～8min，90％A，8～8.1min，90％A～10％A，8.1～10min，10％A；流速：250μL/min；進(jìn)樣量：1μL。離子源：TurboV電噴霧離子源（ESI）；掃描模式：正、負(fù)離子同時(shí)掃描，定時(shí)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)→信息依賴性獲取→增強(qiáng)型子離子掃描（ScheduledMRM→TDA→EP）；掃描范圍：50～650Da；氣簾氣（CUR）：30psi；碰撞氣（CAD）：High；噴霧電壓（IS）：5500V/-4500V；離子源溫度：550℃；霧化氣（GASl）：55psi；輔助氣（GAS2）：55psi。

獲得各化合物的信噪比（S/N），以3倍S/N和10倍S/N對(duì)應(yīng)的濃度來確定30種化合物的檢m限（LOD）和定量限（LOQ）。分別用甲醇和三種空白基質(zhì)溶液來稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制：將30種違禁添加藥物分別稱取約10mg，置于10mL容量瓶中，11種那非類標(biāo)準(zhǔn)品中加入一定量的乙腈超聲溶解后定容，其余標(biāo)準(zhǔn)品加入一定量甲醇超聲溶解后定容，均配制成濃度約為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，并保存于-4℃冰箱中。

分別精確吸取30種標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液適量于一個(gè)100mL容量瓶中，用甲醇稀釋混勻后定容。使?jié)舛葹?～10μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，待使用時(shí)進(jìn)一步稀釋。配制成5個(gè)梯度濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液，共四組。以各日標(biāo)化合物的峰面積（Y）和對(duì)應(yīng)的濃度（X）進(jìn)行線性擬合，得到線性方程、相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，結(jié)果見表3。

采用相對(duì)響應(yīng)值法比較，計(jì)算出30種化合物在三種基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果見表3。實(shí)驗(yàn)表明，30種目標(biāo)化合物在其線性范同內(nèi)，線性關(guān)系均良好，決定系數(shù)（R2）均大于0.996?；|(zhì)效應(yīng)為0.87～1.04，結(jié)果詳見表4，因此三種空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的同歸方程斜率偏差為-4％～13％，均在標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的±20％范圍內(nèi)，EPI無差異，可忽略基質(zhì)效應(yīng)的影響。

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相關(guān)鏈接：甲醇，乙酸銨，乙腈