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在酶用量為2.9%、超聲時間為10min、超聲溫度為55℃的條件下,分別測pH為6、6.5、7、7.5、8的情況下水解1h,其水解度和還原力結(jié)果如圖6、圖7所示。
由圖6、圖7可知,隨著pH的升高,紅花籽粕的水解度和還原力出現(xiàn)先升高,后下降的趨勢,并且在pH為6.5時,其水解度和還原力最大。這可能與紅花籽粕中含有的蛋白的性質(zhì)有關(guān)。因此,選擇6.5為合適pH。
在超聲時間為10min、pH7.0、超聲溫度為55℃的條件下,分別測酶用量為0.9%、1.9%、2.9%、3.9%、4.9%的情況下水解1h,其水解度和還原力結(jié)果如圖8、圖9所示。
由圖8可知,隨著酶用量的增加水解度增大,其中在酶用量為2.9%時水解度最大,圖9可知,隨著酶用量的增大,還原力增大,其中在酶用量為1.9%,還原力最大,其后開始下降,在酶用量2.9%時有下降趨勢,但是不明顯。綜合考慮水解度、還原力和節(jié)約成本因素,認(rèn)為1.9%為最合適酶用量。
由表4正交試驗的結(jié)果表明,通過極差分析表明影響水解度的因素為:pH>超聲時間>超聲溫度>酶用量,影響還原力的因素為:pH>酶用量>超聲溫度>超聲時間,綜合分析來看,最佳的工藝條件為超聲時間10min,超聲溫度65℃,pH6.5,酶用量1.9%。
根據(jù)單因素實驗和正交試驗結(jié)果,綜合考慮酶的成本,選定在超聲時間10min,超聲溫度65℃,pH6.5,酶用量1.9%條件下進行驗證實驗,三次平行試驗,試驗結(jié)果表明水解度為51.1%,還原力的吸光度值為0.428。與正交試驗中所得的值較為接近,證明正交試驗得到紅花籽粕的酶解工藝是可行的。
本試驗先是用木瓜蛋白酶、枯草芽孢桿菌中性蛋白酶、胰蛋白酶對紅花籽粕的酶解進行研究,試驗結(jié)果證明,在55℃條件下用超聲波處理10min促進了酶的分解,提高了蛋白酶的活力,其中木瓜蛋白酶酶解最快,所以選取木瓜蛋白酶進行工藝研究。
木瓜蛋白酶酶解紅花籽粕的工藝研究結(jié)果表明,通過單因素試驗和正交試驗優(yōu)化提取條件,結(jié)果表明影響木瓜蛋白酶的主次因素為pH>超聲溫度>超聲時間>酶用量。綜合考慮酶解液的水解度、還原力和成本等因素確定最佳提取條件為:超聲時間10min,超聲溫度65℃,pH6.5,酶用量1.9%,在此條件下,水解度為51.1%,還原力的吸光度值為0.428。
本試驗在研究蛋白酶酶解紅花籽粕的工藝條件的同時,加入了超聲波輔助水解的研究因素,實驗過程中超聲和水解是同步進行的,通過試驗結(jié)果表明,加入超聲因素進行水解大大提高了所使用的酶的酶活,在節(jié)約成本的同時,大大提高了紅花籽粕的水解度和還原力。
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