北方偉業(yè)計量集團(tuán)有限公司
| 培養(yǎng)基 | 酵母膏粉：10.0，活性炭：2.0，瓊脂：13.0，α-酮戊二酸單鉀鹽：1.0，ACES緩沖液：10.0，氫氧化鉀：2.8，焦磷酸鐵：0.25 |
| 傳代方法 | 使用前請先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽； 1.取細(xì)菌培養(yǎng)液1-5ml，10,000rpm(11,500×g)離心1min，盡量吸凈上清； 2.向菌體沉淀中加入200μL緩沖液GA，振蕩至菌體徹底懸浮。注意：對于較難破壁的革蘭氏陽性菌，可略過第2步驟，加入溶菌酶溶液進(jìn)行破壁處理，具體方法為：加入110μL緩沖液（20mM Tris,pH8.0；2mM Na2-EDTA；1.2%Triton），和70μL溶菌酶溶液（50mg/mL，客戶自備，目錄號：RT401），37℃處理30min以上。如果需要去除RNA，可加入4μL RNase A（100mg/mL）溶液（客戶自備，目錄號：RT405-12），振蕩15sec，室溫放置5min； 3.向管中加入20μL Proteinase K溶液，混勻； 4.加入220μL緩沖液GB，振蕩15sec，70℃放置10min，溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。注意：加入緩沖液GB時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純； 5.加220μL無水乙醇，充分振蕩混勻15sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠； 6.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm(13,400×g)離心30sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中； 7.向吸附柱CB3中加入500μL緩沖液GD（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm(13,400×g)離心30sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中； 8.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm(13,400×g)離心30sec，倒掉廢液，吸附柱CB3放入收集管中； 9.重復(fù)操作步驟8； 10.將吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm(13,400×g)離心2min，倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗； 11.將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200μL洗脫緩沖液TE，室溫放置2-5min，12,000rpm(13,400×g)離心2min，將溶液收集到離心管中。注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50μL，體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室溫放置2min，12,000rpm(13,400×g)離心2min； |
| 生長條件 | 37℃，5%CO2，24-48h。 |
| 存儲條件 | 2-8℃ |
| 安全等級 | 2 |
| 分離基物 | 人類的肺 |
| 共享方式 | 公益性共享 |
| 證書下載 | 說明書文件 |
蠟狀芽孢桿菌基因組DNA
(Genomic DNA from Bacillus cereus)
BNCC369921
兩歧雙歧桿菌基因組DNA
(Genomic DNA from Bifidobacterium bifidum)
BNCC369924
糞腸球菌基因組DNA
(Genomic DNA from Enterococcus faecalis)
BNCC372743
陰道范妮黑塞氏菌基因組DNA
(Genomic DNA from Fannyhessea vaginae)
BNCC362764
雙路普雷沃氏菌基因組DNA
(Genomic DNA from Prevotella bivia)
BNCC362765
需血斯尼思氏菌基因組DNA
(Genomic DNA from Sneathia sanguinegens)
BNCC362766
肺炎鏈球菌
BNCC338425
幽門螺旋桿菌
BNCC354364
7H10瓊脂即用型平板
BNCC360851
人肺鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞
BNCC338363
羅伊氏乳桿菌
BNCC192190
小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞
BNCC337749
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