北方偉業(yè)計(jì)量集團(tuán)有限公司
培養(yǎng)基 | 酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,氯化鈉:10.0,瓊脂:15.0,pH:7.0±0.2(25℃) |
傳代方法 | 1.取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于冰上待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。 2.每100μl感受態(tài)加1ug(體積不大于10ul)質(zhì)粒DNA,用手撥打管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、28℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。 3.加入700μl無(wú)抗生素的LB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。 4.6000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天(當(dāng)平板只含有50ug/ml kan 時(shí),28℃培養(yǎng)48h即可;平板中同時(shí)加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 時(shí),需28℃培養(yǎng)60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h)。 |
生長(zhǎng)條件 | 28℃;18-24h;好氧; |
存儲(chǔ)條件 | -80℃ |
安全等級(jí) | 1 |
共享方式 | 公益性共享 |
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