北方偉業(yè)計(jì)量集團(tuán)有限公司
培養(yǎng)基 | 酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,pH:7.0(25℃) |
傳代方法 | 1.溶解: 收到質(zhì)粒干粉后,請(qǐng)加入 20μl 無(wú)菌水至管底,溶解質(zhì)粒,室溫靜置 1min; 2.混合(吸附質(zhì)粒): 200μl 感受態(tài)細(xì)胞 + 質(zhì)粒 DNA 5~10µl 混勻,冰上放置 30min; 3.熱激導(dǎo)入: 42℃靜置 90s; 4.收縮膜孔: 冰浴 2min; 5.修復(fù)培養(yǎng): 毎管加 800µl LB 液體培養(yǎng)基,37 ℃培養(yǎng) 1h 150 r/min; 6.篩選培養(yǎng): 將適當(dāng)體積(100 µl)的復(fù)蘇細(xì)胞,涂布在相應(yīng)抗性的 LB 平板上,正置平皿 30min(瓊脂面務(wù)必干燥后), 倒置培養(yǎng) 12-16h,出現(xiàn)菌落。 7.提?。? 挑取單克隆菌落至相應(yīng)抗性 LB 液體培養(yǎng)基中,震蕩培養(yǎng) 12-16h,根據(jù)試驗(yàn)需要提取質(zhì)粒。 |
生長(zhǎng)條件 | LB+氨芐青霉素,37℃(克隆菌株DH5α,2961bp) |
存儲(chǔ)條件 | 2-8℃ |
安全等級(jí) | 0 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | pBluescript II KS(+)是一種大腸桿菌質(zhì)粒,源自噬菌體,是一種廣泛應(yīng)用于分子克隆的載體。該載體被廣泛應(yīng)用于克隆和測(cè)序?qū)嶒?yàn),包括DNA測(cè)序、嵌套缺失構(gòu)建、體外RNA轉(zhuǎn)錄、定點(diǎn)突變和基因定位等研究。pBluescript II KS(+)具有21個(gè)獨(dú)特的限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn),使得插入和操作DNA變得非常靈活。其多克隆位點(diǎn)(MCS)兩側(cè)分別包含T7和T3 RNA聚合酶啟動(dòng)子序列,主要用于支持RNA的體外合成 |
共享方式 | 公益性共享 |
證書下載 | 說明書文件 |
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