蘆?。≧utin），又名蕓香苷，屬于多羥基黃酮類化合物，具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤、降血脂等多種藥理作用，在臨床上主要用于治療高血壓、糖尿病、心血管疾病等多種疾病。此外，蘆丁還作為原料被應(yīng)用于醫(yī)藥、保健品和化妝品行業(yè)，是一種極具開發(fā)潛力的天然活性物質(zhì)。蘆丁廣泛存在于槐米、桑葉、苦蕎麥、小薊等植物中，其中槐米中的含量較為豐富，是工業(yè)提取蘆丁的主要原料。

槐米（Flossophorae），豆科植物槐樹（SophorajaponicaL.）的干燥花蕾及花。在中醫(yī)臨床上作為止血劑，用來治療痔瘡、子宮出血，并有清肝瀉火、治療肝熱目赤的功效。目前從槐米中提取蘆丁的方法主要有堿溶酸沉法、醇回流法、微波法和超聲法，但這些提取方法存在一定的不足之處，如堿提酸沉法提取率低；醇回流法提取時間長；微波法和超聲法使用的超聲發(fā)生器和微波儀價格昂貴，提取成本較高。因此，探尋一種新的高效、快速、便捷的提取方法就顯得尤為重要。

溶劑熱法是納米材料和功能材料合成的常用方法，其主要原理是以有機(jī)物或有機(jī)物的水溶液為反應(yīng)溶劑，通過調(diào)控反應(yīng)溫度，使密閉體系內(nèi)的壓力升高，從而使得溶劑在高于正常溶劑沸點(diǎn)溫度的情況下仍保持液體狀態(tài)，但其物理化學(xué)性質(zhì)，如，表面張力、極性、氫鍵等發(fā)生改變，進(jìn)而提高反應(yīng)速度和產(chǎn)物提取率。目前尚未見應(yīng)用溶劑熱法提取蘆丁的文獻(xiàn)報道，因此本試驗(yàn)對該提取方法進(jìn)行了研究，并采用響應(yīng)面法對該法進(jìn)行了優(yōu)選，以期為蘆丁的提取提供一種新方法，同時也為槐米的深度開發(fā)提供參考。

一、材料與方法

1、材料與儀器

槐米（洛陽中藥材市場，粉碎過80目篩，備用）；冰乙酸（分析純），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；蘆丁對照品，大連美侖生物技術(shù)有限公司；甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；水為超純水。天美LC2000液相色譜儀，上海天美科學(xué)儀器有限公司；CT14RD高速離心機(jī)，上海天美生化儀器設(shè)備有限公司；BT125D雙量程電子分析天平，德國多利斯公司；聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜，福建物質(zhì)結(jié)構(gòu)研究所；PHG9246A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

2、試驗(yàn)方法

（1）色譜條件

色譜柱：KromasilC18柱子（250×4.6mm，5μm），流動相：甲醇-水-冰乙酸（46∶52∶2，v/v）；流速：1mL/min；檢測波長：360nm；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：室溫。

（2）蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取蘆丁對照品10.0mg，50%甲醇溶液定容于200mL容量瓶中，移取蘆丁對照品溶液5mL、10mL、15mL、20mL、25mL分別置于100mL容量瓶中，50%甲醇定容。按照色譜柱：KromasilC18柱子（250×4.6mm，5μm），流動相：甲醇-水-冰乙酸（46∶52∶2，v/v）；流速：1mL/min；檢測波長：360nm；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：室溫色譜條件進(jìn)樣，采用峰面積外標(biāo)法繪制蘆丁濃度（X）與峰面積（Y）的回歸方程。

（3）單因素試驗(yàn)

稱取槐米0.20g，置于25mL聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜中，加入一定濃度的乙醇溶劑，在設(shè)定的條件下（考察乙醇濃度、提取時間、提取溫度、液料比）進(jìn)行提取。提取結(jié)束后，自然冷卻至室溫。移取2.0mL提取液以8，000r/min離心3min，取上清液0.5mL于100mL容量瓶中，50%甲醇定容，搖勻，過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液作為供試液。檢測蘆丁含量，按下式計算樣品中蘆丁的提取率Y。

蘆丁提取率Y（%）=C×V×n/10⁴M；

式中C為提取液中蘆丁濃度（μg/mL），V為提取溶劑的體積（mL），n為稀釋倍數(shù)，M為槐米質(zhì)量（g）。

（4）響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，依據(jù)Design-Expert8.0.6.1軟件中的CentralComposite設(shè)計原理，選乙醇濃度（A）、提取時間（B）、提取溫度（C）和液料比（D）為4個考察因素，蘆丁提取率（Y）為響應(yīng)值，進(jìn)行四因素五水平的試驗(yàn)設(shè)計，以確定槐米中蘆丁最佳提取工藝條件。因素水平表見表1。

二、結(jié)果與分析

1、蘆丁含量的測定

圖1是蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的高效液相譜圖。從圖中可以看出，在以上色譜條件下，蘆丁峰形對稱，可用于溶液中蘆丁含量的測定。同時，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），蘆丁濃度為橫坐標(biāo)（X），得到蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=32120X-12042，R²=0.9993。蘆丁濃度在2.5～12.5μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2、單因素試驗(yàn)分析

（1）乙醇濃度

稱取0.20g的槐米粉末5份，分別加入水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇和乙醇16mL于聚四氟乙烯的反應(yīng)釜內(nèi)，90℃提取30min，結(jié)果見圖2。從圖中可以看出，乙醇濃度低于50%時，隨著乙醇濃度的升高，蘆丁提取率隨之升高。原因可能是由于乙醇的滲透能力較強(qiáng)，增加乙醇濃度提高了蘆丁在提取溶劑與細(xì)胞基質(zhì)之間的溶解平衡，所以乙醇濃度升高有利于蘆丁的提取。但蘆丁的極性較大，繼續(xù)提高乙醇濃度，溶劑的極性變小，根據(jù)相似相溶原理，蘆丁的溶解度會隨之變小，因此蘆丁的提取率降低。因此，選擇乙醇溶度為50%較為適宜。

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