北方偉業(yè)計(jì)量集團(tuán)有限公司
食品安全問題一直是政府和社會(huì)普遍關(guān)注的問題,現(xiàn)階段,在農(nóng)業(yè)種植過程中,農(nóng)藥的過量使用導(dǎo)致食品中農(nóng)藥含量過高,生物傳感技術(shù)的應(yīng)用,可充分滿足食品行業(yè)農(nóng)藥檢測需求,且提高了食品農(nóng)藥殘留檢測精確度。
在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)種植中,農(nóng)作物經(jīng)常受蟲害、草害影響,而農(nóng)藥作為非常有效的治理手段,在農(nóng)業(yè)種植中被普遍應(yīng)用,過量使用農(nóng)藥,或在農(nóng)作物收獲前期使用多種農(nóng)藥,以保證農(nóng)作物產(chǎn)量和質(zhì)量,會(huì)導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留過多,引起食品安全問題,需使用必要的檢測手段,以確定農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥含量,避免食品安全問題。
1 抑制型生物傳感器
1.1 膽堿酯酶
膽堿酯酶的活性會(huì)受到農(nóng)藥中一些物質(zhì)的抑制,主要包括有機(jī)磷、氨基甲酸酶,另外,重金屬、尼古丁等也對膽堿酯酶具有抑制作用,所以利用膽堿酯酶進(jìn)行農(nóng)藥檢測時(shí),會(huì)受到重金屬、尼古丁等物質(zhì)的干擾,從而影響食品農(nóng)藥殘留檢測的質(zhì)量。利用膽堿酯酶進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測時(shí),要保證電極上膽堿酯酶活性的可靠性,對其進(jìn)行固定化。
1.1.1 電化學(xué)檢測型
①乙酰膽堿酯酶(AchE)電流型生物傳感器,基于膽堿酯酶進(jìn)行農(nóng)藥檢測時(shí),檢測樣品無需任何處理,相關(guān)研究人員使用該傳感器,檢測茄子、白菜、柿子中的農(nóng)藥殘留,檢測結(jié)果顯示,其檢測限是30.4 ng/mL;檢測食品中的馬拉硫磷的檢測限為0.058 ng/mL,定量檢測限為0.044 ng/mL;其在乙酰甲胺磷農(nóng)藥檢測中的應(yīng)用,檢測限為0.194 ng/mL,定量檢測限為0.147 ng/mL。②乙酰膽堿酯酶(AchE)電流型生物傳感器主要測定的是pH值,通過金屬氧化電極測定傳感器表面酶層pH來確定農(nóng)藥的含量?,F(xiàn)階段,研究人員研發(fā)出一種便攜式的電勢型Ache傳感器,并提升了檢測的精確度,可以對0.25 ng/mL~38.5 μg/mL濃度的農(nóng)藥進(jìn)行檢測,可測定滅多蟲、OP農(nóng)藥(乳化劑類農(nóng)藥);研究人員使用甲基纖維素、牛血清白蛋白作為捕獲劑,將Ache膜層固定在pH電極上,制作成電勢型傳感器,通過檢測試驗(yàn)證實(shí),5種農(nóng)藥的檢測限為10-7 mol/L。
1.1.2 熒光檢測型
將膽堿酯酶傳感器與熒光檢測技術(shù)相結(jié)合。研究人員使用酶(AchE、膽堿氧化酶)、乙酰膽堿、量子點(diǎn)等制作成一種新型的生物傳感器,可以檢測出食品中的敵敵畏,研究人員以蘋果為樣品進(jìn)行檢測,檢測原理如圖1所示。如果檢測樣品中有敵敵畏殘留,則會(huì)抑制AchE的活性,然后抑制膽堿氧化酶,從而減少H2O2的生成量,量子點(diǎn)上的熒光淬滅變?nèi)酰虼藷晒獯銣缧Чc敵敵畏濃度存在一定的關(guān)聯(lián),據(jù)此可完成檢測,其檢測限為4.50 nmol/L。
1.2 過氧化物酶
對過氧化物酶有抑制作用的物質(zhì)有很多種,包括金屬、重鉻酸鹽、半胱氨酸、羥胺、硫化物等,借助這些物質(zhì)對過氧化物酶的抑制作用,制作出的生物傳感器可用于檢測食品中的農(nóng)藥殘留,一般使用的測定方法是方波伏安法,主要用于測定硫雙威,從苜蓿芽中提取過氧化物酶,并將其固定在金電極上,借助L-半胱氨酸測定白菜樣品中的硫雙威含量,最終獲取硫雙威的檢測限為5.81×10-7 mol/L,檢測范圍是2.31×10-6~4.39×10-5 mol/L。應(yīng)用基于過氧化物酶的生物傳感器測量方法,將過氧化物酶固定化,在檢測過程中不會(huì)受到基質(zhì)影響,并且在檢測之前也不用進(jìn)行衍生化加工,檢測成本較低,且耗時(shí)較少,具有應(yīng)用和推廣優(yōu)勢。
1.3 酸性磷酸酶
利用農(nóng)藥對酸性磷酸酶的抑制作用,研究人員研發(fā)出電流型雙酶(酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶)生物傳感器,主要應(yīng)用物理和化學(xué)方法,在安培計(jì)電極上固定兩種酶,可檢測農(nóng)藥中的有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥。還有一種是混合型的生物傳感器,沒有將酸性磷酸酶固定在電極上,而是固定在馬鈴薯切片上,以提高酶的活性,應(yīng)用這兩種傳感器,檢測OP農(nóng)藥,獲取的檢測限為1 μg/L;用于檢測G6P(葡萄糖-6磷酸),兩種傳感器的檢測限是4.9×10-5~1.3×10-3 mol/L。
2 免疫生物傳感器
其主要將抗體或抗原作為檢測元素,對農(nóng)藥中特定的分子進(jìn)行檢測,而大部分酶生物傳感器,只能測定出農(nóng)藥的總含量,而不能檢測出特定的分子,免疫生物傳感器的出現(xiàn),彌補(bǔ)了酶傳感器的不足,并且免疫型生物傳感器的體積較小、成本較低,并且可進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測。應(yīng)用抗體或者是抗原進(jìn)行食品農(nóng)藥殘留檢測,已經(jīng)成為生物傳感技術(shù)發(fā)展和應(yīng)用的主要方向。一般使用的測定方法是競爭法,但是這種方法操作較為復(fù)雜,所以非標(biāo)記型傳感器得到快速發(fā)展,并得到很好地應(yīng)用,與標(biāo)記型傳感器相比,非標(biāo)記傳感器檢測成本較低,以及具備實(shí)時(shí)檢測能力,但是其缺點(diǎn)是體積較大,操作過于復(fù)雜,不適用于快速檢測。
2.1 電化學(xué)式
在食品農(nóng)藥殘留檢測行業(yè)中,電化學(xué)免疫傳感器類型較多。①非標(biāo)記型,用于測定農(nóng)藥莠去津,將AuNPs(金納米粒子)固定在金電極上,提升莠去津單克隆抗體的固載量,提高金電極的檢測靈敏度,然后使用傳感器進(jìn)行檢測,使抗體與莠去津互相作用,產(chǎn)生信號(hào),接著應(yīng)用微分脈沖伏安法進(jìn)行測定,應(yīng)用該方法檢測莠去津農(nóng)藥含量的線性范圍是0.05~0.5 ng/mL,檢測限為0.015 ng/mL。②競爭型,研究人員在傳感器的電極上,安裝了IDuEs(集成微電極),用來檢測紅酒中的莠去津含量,最大檢測濃度是10-9 ng/mL,應(yīng)用的是直流型傳感器,所以檢測的成本較低。
2.2 機(jī)械式
微懸臂梁傳感器通過應(yīng)力變化進(jìn)行農(nóng)藥含量檢測,將抗體固定在金電極上,然后使其與樣品相互作用,從而應(yīng)力發(fā)生變化,促使懸臂發(fā)生位移。將二氯苯氧乙酸和莠去津抗體固定在金電極表面,形成一個(gè)活性免疫層,農(nóng)藥與兩種抗體之間的粘附力,需使用原子力顯微鏡懸臂測量。
3 結(jié)語
目前,生物傳感技術(shù)在食品農(nóng)藥殘留檢測中,已得到廣泛應(yīng)用,且可檢測復(fù)雜的農(nóng)藥殘留樣品?;诿傅纳飩鞲衅鞒霈F(xiàn)和應(yīng)用的時(shí)間最早,也是應(yīng)用最多的生物傳感技術(shù),其檢測操作簡便、速度快,且靈敏度高,其中,傳感器靈敏度與酶的活性密切相關(guān),所以在農(nóng)藥殘留檢測過程中,要使用技術(shù)手段,保持和提高酶的活性,增加其靈敏度,以保證檢測的精確度。另外,免疫生物傳感器,主要用于水溶性農(nóng)藥的測定,檢測比較便捷,具有很強(qiáng)的專一性。因此,在農(nóng)藥殘留檢測工作中,需要根據(jù)檢測對象選擇合適的生物傳感器,從而保證農(nóng)藥殘留檢測工作質(zhì)量。
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