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RAW264.7細胞用含50ng/mLRANKL的培養(yǎng)基培養(yǎng)6d，如圖4所示，RAW264.7細胞可誘導為圓形、橢圓形或不規(guī)則多核破骨細胞，并在細胞周圍可以看到凸起的偽足。表明RAW264.7細胞可誘導為成熟的破骨細胞用于試驗。
通過MTT法測定染料木素和維生素D3作用6d對RAW264.7細胞生長的影響。如圖5a所示，1.56～50.00μmol/L濃度的染料木素對RAW264.7細胞無毒性，如圖5b所示，3.12～100.00μmol/L濃度的維生素D3對RAW264.7細胞無毒性。
通過MTT法測定染料木素和維生素D3作用24h對破骨細胞增殖的影響。如圖6a所示，濃度在1.56～50.00μmol/L范圍內(nèi)染料木素對破骨細胞增殖具有顯著抑制作用。如圖6b、6d所示，濃度在6.25～50.00μmol/L范圍內(nèi)維生素D3對破骨細胞增殖具有顯著的促進作用，與染料木素聯(lián)合使用后，這種促進作用受到抑制。與對照組相比，聯(lián)合組在3.12～50.00μmol/L濃度下破骨細胞的增殖受到顯著抑制，而在3.12～25.00μmol/L濃度下，與染料木素組相比，破骨細胞的增殖受到抑制。結(jié)果表明，維生素D3可以促進破骨細胞的增殖，但與染料木素結(jié)合可以抑制破骨細胞的增殖。
采用TRAP試劑盒測定藥物作用于破骨細胞24h后對TRAP活性的影響。如圖7所示，染料木素、維生素D3和聯(lián)合用藥組均顯著抑制破骨細胞的TRAP酶活性。聯(lián)合用藥組相比單藥抑制作用更強。
如圖8a所示，與對照組相比，試驗組中破骨細胞的TRAPmRNA表達均被抑制，且聯(lián)合組的抑制作用更顯著。如圖8b所示，與對照組相比，試驗組中對破骨細胞TRAPmRNA表達抑制作用隨濃度增加而減弱。如圖8c和8d所示，與對照組相比，試驗組破骨細胞中MMP9mRNA的表達均被抑制，而與染料木素和維生素D3單組相比，聯(lián)合組中MMP9mRNA的表達顯著降低，并且當濃度增加時，抑制作用減弱。如圖8e、8f所示，染料木素對破骨細胞中組織蛋白酶KmRNA的表達有明顯的抑制作用，但在6.25～50.00μmol/L的濃度下，維生素D3卻顯著促進了組織蛋白酶K的表達。所以，染料木素逆轉(zhuǎn)了維生素D3對組織蛋白酶KmRNA表達的促進作用，使聯(lián)合組對其表達量明顯降低。
試驗數(shù)據(jù)顯示染料木素和維生素D3聯(lián)合使用比單獨用藥對成骨細胞的增殖具有顯著的促進作用，同時也對破骨細胞有顯著的抑制作用。證實染料木素和維生素D3對促進成骨細胞增殖和抑制破骨細胞增殖具有協(xié)同作用。維生素D3與染料木素聯(lián)合用藥作用于MG-63細胞，ALP活性明顯增強，說明二者聯(lián)合能促進成骨細胞的早期分化，與文獻報道過的黃酮促進成骨細胞分化一致。通過10%的CPC將鈣結(jié)節(jié)量化，得出聯(lián)合用藥能促進鈣結(jié)節(jié)的生成，促進成骨細胞礦化。本文還測定了OPG、RANKLmRNA的相對表達量，并比較了不同濃度不同組的OPG/RANKL比值。發(fā)現(xiàn)維生素D3和染料木素聯(lián)合可能是通過OPG/RANKL/RANK通路促進成骨細胞成熟，有待進一步研究。
本文通過對破骨細胞TRAP活性檢測以及TRAP、MMP9、組織蛋白酶KmRNA的表達，發(fā)現(xiàn)維生素D3和染料木素聯(lián)合用藥能抑制破骨細胞的分化成熟。維生素D3在6.25～50.00μmol/L，可顯著促進破骨細胞成熟和組織蛋白酶K的表達，同時顯著抑制破骨細胞成熟的標記因子MMP9的表達。維生素D3和染料木素的組合可顯著抑制破骨細胞的增殖和分化，染料木素在試驗劑量內(nèi)逆轉(zhuǎn)了維生素D3對破骨細胞的促進作用。
本文證實，染料木素可增強成骨細胞MG-63的增殖和分化，從而促進抗骨質(zhì)疏松作用。有趣的是，高劑量的維生素D3可促進破骨細胞的增殖成熟從而促進骨質(zhì)疏松作用，但是在維生素D3和染料木素聯(lián)合使用時，這種作用可以逆轉(zhuǎn)，抗骨質(zhì)疏松作用也很明顯。染料木素和維生素D3在抗骨質(zhì)疏松癥上的協(xié)同作用提供了一種新穎而有效的組合，在骨質(zhì)疏松癥的飲食療法中具有應(yīng)用的潛力。
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根據(jù)內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局2021年庫倫蕎麥高質(zhì)量標準體系建設(shè)統(tǒng)一部署，通遼市市場監(jiān)督管理局組織相關(guān)專家于2021年11月16日在庫倫旗召開了《庫倫蕎麥高質(zhì)量標準體系》標準草案研討會.
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龍眼屬于無患子科龍眼屬，又名桂圓、益智、龍目等，在中國、泰國、越南、老撾、馬來西亞、菲律賓、馬達加斯加等國家均有分布，是典型的亞熱帶常綠果樹。龍眼營養(yǎng)價值和藥用價值較高，果肉中含有水分、蛋白質(zhì)、維生素、碳水化合物、纖維素、脂肪、礦物營養(yǎng)元素、氨基酸、皂素、鞣質(zhì)及膽堿等，具有抗衰老、抗癌、養(yǎng)血安神、潤膚美顏等功效，也有“南方小人參”之美譽。
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