2.4 方法學驗證

2.4.1 線性方程、線性范圍與檢出限

按1.2儀器工作條件測定1.3.2配制的系列標準工作溶液，以各元素的每秒計數(shù)（CPS）與內(nèi)標元素CPS的比值（y）為縱坐標，以標準溶液質(zhì)量濃度（x，μg/L）為橫坐標繪制標準工作曲線，線性回歸計算得7種元素的線性方程。7種元素的線性方程，線性范圍和相關(guān)系數(shù)見表1。各元素相關(guān)系數(shù)為0.9997～1.0000，說明線性關(guān)系良好。

11次測定標準空白溶液得到各元素的CPS，計算11次CPS的標準偏差（SD），以3SD對應(yīng)樣品中待測元素含量為方法的檢出限（LOD），計算得V、Co、Ni、As、Cd、Pb、Hg方法檢出限分別為0.0010、0.0015、0.0060、0.0054、0.0040、0.0024、0.0052mg/kg。

定量限濃度要滿足準確度的要求，意味著必須對定量限濃度進行加標回收試驗驗證。定量限濃度設(shè)置為線性最低點，7種元素的定量限均為0.1mg/kg，經(jīng)加標回收試驗驗證，能滿足準確度的要求。

2.4.2 準確度試驗

采用加標溶液的回收率來評價方法的準確度。精密稱取12份阿莫西林樣品，分為3組，分別作為低、中、高濃度的加標樣品，平行樣品數(shù)分別為3、6、3份，加入適量多元素標準溶液，使其最終溶液中各元素質(zhì)量濃度均分別為0.5、5、50μg/L；另取12份樣品，加入適量Hg標準溶液，使其最終溶液中元素質(zhì)量濃度分別為0.5、2、5μg/L；按實驗方法測定，結(jié)果見表2。

由表2可知，在3個濃度加標水平下，7種元素的平均回收率為86.1%～130.9%，均在70%～150%之間，滿足準確度要求。

2.4.3 重復性試驗

重復性試驗由加標回收試驗中間濃度的6次平行測定結(jié)果來評估，以各元素實際測定值的相對標準偏差表示，結(jié)果見表3。由表3可知，V、Co、Ni、As、Cd、Pb、Hg測定結(jié)果的相對標準偏差分別為2.0%、1.6%、2.0%、2.6%、2.5%、1.5%、4.5%，均小于20%，滿足方法重復性要求。

2.4.4 中間精密度試驗

中間精密度由準確度實驗中所使用的中間濃度加標溶液來評估，由2名分析人員在不同的時間各自獨立測試6份加標樣品，以12份樣品中各元素實際測定值的相對標準偏差表示。V、Co、Ni、As、Cd、Pb、Hg測定值的相對標準偏差分別為2.2%、1.3%、3.2%、4.6%、5.7%、4.9%、6.3%，均小于25%，滿足中間精密度要求。

2.5 實際樣品測定

按上述建立的方法，測定了3批阿莫西林樣品中的7種元素雜質(zhì)，結(jié)果表明，各批次阿莫西林樣品中7種元素雜質(zhì)的含量均低于定量限，說明其安全風險較小。

3 結(jié)論

（1）建立了ICP–MS方法測定阿莫西林原料藥中V、Co、Ni、As、Cd、Hg和Pb7種雜質(zhì)元素含量的方法。方法學驗證表明該方法準確度與精密度良好。

（2）采用2%硝酸溶解樣品的樣品前處理方法，與微波消解等消解方法相比，操作簡便、省時、快速，能夠節(jié)省試劑使用量、同時也減少樣品消解過程帶來的本底、試劑污染。

（3）該方法可為阿莫西林原料藥中7種雜質(zhì)元素的質(zhì)量控制、原料藥中元素雜質(zhì)分析方法的建立與評價提供參考。

（4）樣品處理方法的優(yōu)化過程中發(fā)現(xiàn)，溶液中的有機成分會增加As元素在等離子體中的電離，導致回收率變大，在原料藥元素雜質(zhì)分析方法開發(fā)過程中應(yīng)該優(yōu)化出合適的取樣量。

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