2 結(jié)果與討論

2.1 蛋白質(zhì)與膠體粒子動(dòng)態(tài)光散射自相關(guān)函數(shù)分析

圖1a是A，B，C3種不同膠體粒子分散到Tris-HCl緩沖液的自相關(guān)函數(shù)，它們尺寸不同，其中，膠體粒子B表面接有羧基基團(tuán)?？梢钥闯鲞@3種膠體粒子相關(guān)函數(shù)均沿弛豫時(shí)間軸快速移動(dòng)到較短時(shí)間，說明這3種膠體粒子本身均一性較好，粒徑均呈單峰分布且較集中，沒有發(fā)生聚集現(xiàn)象，可以排除膠體粒子本身對(duì)試驗(yàn)準(zhǔn)確性造成的干擾。

可以從圖1b看出膠體粒子C分散的溶液體系中自相關(guān)函數(shù)沿著弛豫時(shí)間并沒有快速移動(dòng)，且相關(guān)函數(shù)沒有衰減到0，粒徑呈多峰分布。說明在膠體粒子C存在的體系中，lys與膠體粒子C發(fā)生強(qiáng)相互作用，發(fā)生較為嚴(yán)重的聚集現(xiàn)象且有大顆粒產(chǎn)生。所以，使用膠體粒子C測(cè)蛋白黏度所得到的黏度值與真實(shí)值有偏差。從圖1c、1d可以看出BSA和BLG體系的自相關(guān)函數(shù)沿著弛豫時(shí)間均快速移動(dòng)到較短時(shí)間，并且相關(guān)函數(shù)都能衰減到0，粒徑分布峰寬較窄且集中。說明BLG和BSA與3種膠體粒子之間均沒有發(fā)生強(qiáng)相互作用產(chǎn)生大顆粒。而且整體來看，蛋白濃度的改變對(duì)粒子間相互作用影響不大。

2.2 膠體粒子Zeta電位值測(cè)定分析

由于膠體粒子C與lys混合體系存在大顆粒，為了進(jìn)一步探究膠體粒子與蛋白之間的相互作用，本試驗(yàn)測(cè)定了3種膠體粒子單一分散體系的Zeta電位值。從圖2中可以看出，A，B，C3種膠體粒子均帶負(fù)電，并且A與B所帶負(fù)電荷明顯少于C，而蛋白溶液所處環(huán)境pH值為7.4，在此條件下，BSA（pI=4.7），BLG（pI=5.2），OVA（pI=4.7），3種蛋白表面均帶大量負(fù)電荷，因此與膠體粒子之間沒有較強(qiáng)的靜電荷相互吸引作用。而lys的等電點(diǎn)pI=11.35高于7.4，蛋白表面會(huì)帶較多正電荷，因而會(huì)與膠體粒子C發(fā)生較強(qiáng)的靜電相互吸引作用，甚至產(chǎn)生聚集現(xiàn)象。這也解釋了1中的試驗(yàn)現(xiàn)象。因此在后續(xù)lys體系黏度測(cè)量時(shí)，我們選擇了A與B兩種膠體粒子。

2.3 膠體粒子Rg測(cè)定分析

為了進(jìn)一步說明液體分散體系中蛋白與膠體粒子之間是否存在強(qiáng)相互作用，確保動(dòng)態(tài)光散射測(cè)量蛋白黏度的可靠性，我們利用靜態(tài)光散射測(cè)量了旋轉(zhuǎn)半徑Rg。通過監(jiān)測(cè)Rg隨蛋白濃度梯度的變化，進(jìn)一步證實(shí)所測(cè)結(jié)果的變化是由粒子間相互作用減弱所致還是由顆粒本身的幾何形狀變化所致。

通過圖3可以看出，膠體粒子分散在緩沖液中測(cè)得的Rg和分散到蛋白溶液中測(cè)得的Rg相比沒有顯著性差異。只有在BLG與膠體粒子B的體系中，Rg隨蛋白濃度改變出現(xiàn)輕微變化。從整體來看，蛋白濃度這一因素對(duì)粒子之間的相互作用沒有較大影響。

2.4 lys-膠體粒子體系黏度測(cè)定

為了驗(yàn)證動(dòng)態(tài)光散射測(cè)量溶液黏度方法的可行性，首先在水溶液中加入粒徑不同的膠體粒子測(cè)定純水的黏度。其次為了避免緩沖液對(duì)黏度的影響，在Tris-HCl緩沖液中加入3種膠體粒子測(cè)定了緩沖液黏度。結(jié)果顯示緩沖液與純水黏度差異不大，說明緩沖液對(duì)黏度測(cè)量基本無影響。

可以從圖4看出，lys蛋白溶液的黏度隨著蛋白濃度的增加有輕微上升趨勢(shì)?？赡苁怯捎趌ys在較低濃度時(shí)對(duì)于蛋白黏度影響較小，蛋白溶液分子內(nèi)和分子之間的氫鍵作用比較弱。為了進(jìn)一步證明測(cè)得溶液黏度值真實(shí)有效，本試驗(yàn)結(jié)合宏觀流變測(cè)定了溶液黏度，如表3所示。通過將微觀與宏觀測(cè)得的黏度值進(jìn)行顯著性分析，發(fā)現(xiàn)A與B得到的lys黏度特性沒有明顯差異，說明A，B均可適用于lys黏度的測(cè)定。從以上結(jié)果可以初步得出，膠體粒子的粒徑對(duì)lys蛋白表觀黏度測(cè)定影響較小。

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