2.4 野生牛肝菌內(nèi)生真菌的生物學(xué)特性

2.4.1 3種培養(yǎng)基對(duì)內(nèi)生真菌生長(zhǎng)速度的影響

為掌握4株內(nèi)生真菌的生物學(xué)特性，選擇CPDA、Pachlewski、MMN為供試培養(yǎng)基，研究3種培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度的影響，25℃培養(yǎng)，在9cm的平板上采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，結(jié)果如圖4所示。由圖4可知，在培養(yǎng)第4d時(shí)進(jìn)行菌落直徑測(cè)量，CPDA上的生長(zhǎng)速度明顯優(yōu)于其他2種培養(yǎng)基，內(nèi)生真菌LCTG12培養(yǎng)5d，LCCK-6培養(yǎng)6d，BSHC-18培養(yǎng)7d，BBFO-10培養(yǎng)8d可長(zhǎng)滿平板，故選擇CPDA培養(yǎng)基為4種內(nèi)生真菌的最適培養(yǎng)基。

2.4.2 液態(tài)發(fā)酵對(duì)內(nèi)生真菌生物量的影響

在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇CPDA培養(yǎng)基進(jìn)行4種內(nèi)生真菌的液態(tài)搖瓶實(shí)驗(yàn)，在25℃，160r/min條件下培養(yǎng)0～10d，收集0、2、4、6、8、10d的菌絲，3次平行實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖5所示。由圖5可知，0～8dLCTG12、LCCK-6、BBFO-10生物量均呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，第8d時(shí)LCTG-12的生物量為4.13g/L，LCCK-6為1.65g/L，BBFO-10為3.44g/L，此時(shí)生物量最大，之后不再增長(zhǎng)，這可能與培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗殆盡有關(guān)。但是BSHC-18的液態(tài)發(fā)酵菌絲量增長(zhǎng)緩慢，最高為1.14g/L，這與黃瘤孢菌（BSHC-18）的孢子繁殖的生物學(xué)特性有關(guān)，可見(jiàn)它不適于液態(tài)發(fā)酵生長(zhǎng)菌絲。

2.4.3 野生牛肝菌內(nèi)生真菌的拮抗性

為探究牛肝菌內(nèi)生真菌之間是否存在拮抗關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)從牛肝菌中分出的3株內(nèi)生真菌，進(jìn)行對(duì)峙實(shí)驗(yàn)，在25℃條件下培養(yǎng)5d，蓋姆斯木霉LCTG-12、黃瘤孢菌BSHC-18和尖孢鐮刀菌BBFO-10的對(duì)照組菌落形態(tài)如圖1-a-1、1-c-1和1-d-1所示，拮抗對(duì)峙圖如圖6所示。

由圖6a可知，蓋姆斯木霉對(duì)尖孢鐮刀菌的生長(zhǎng)具有拮抗作用，其菌落與鐮刀菌接觸的邊界處，鐮刀菌有明顯向外退縮生長(zhǎng)，由于每組對(duì)峙設(shè)置3組重復(fù)，故其對(duì)尖孢鐮刀菌的平均抑制率為53.7%；由圖6b可知，黃瘤孢菌與尖孢鐮刀菌之間可互相抑制生長(zhǎng)，且黃瘤孢菌產(chǎn)黃色孢子的時(shí)間明顯延后，彼此的平均抑制率分別為：41.8%、33.6%；由圖6c可知，蓋姆斯木霉對(duì)黃瘤孢菌的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，黃瘤孢菌未有產(chǎn)孢現(xiàn)象，其對(duì)黃瘤孢菌的平均抑制率為74.7%。

3 結(jié)論

食藥用菌內(nèi)生真菌是一類(lèi)尚未充分開(kāi)發(fā)與利用，并且應(yīng)用前景廣泛的微生物，為探究野生牛肝菌中內(nèi)生真菌資源，及分析其內(nèi)生真菌間是否存在拮抗關(guān)系，本文從3種新鮮野生牛肝菌子實(shí)體中分離純化共得到23株純菌，篩選出4株具有典型特征的純菌進(jìn)行形態(tài)觀察和ITSrDNA現(xiàn)代分子生物學(xué)鑒定，鑒定出4株內(nèi)生真菌分別為蓋姆斯木霉、克魯伊假絲酵母、黃瘤孢菌及尖孢鐮刀菌，并對(duì)幾株內(nèi)生真菌生物學(xué)特性進(jìn)行研究，得出結(jié)論：CPDA培養(yǎng)基較適合這4株菌的生長(zhǎng)，其中蓋姆斯木霉的生長(zhǎng)速度較快，5d即可長(zhǎng)滿9cm的平板，其余3種菌株長(zhǎng)滿板的時(shí)間分別為6、7、8d，并且蓋姆斯木霉對(duì)黃瘤孢菌和尖孢鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)均有拮抗作用，黃瘤孢菌和尖孢鐮刀菌兩者之間也具有拮抗作用。由于實(shí)驗(yàn)采用人工合成培養(yǎng)基的局限性，故本研究所分離的菌株不能完全詮釋野生牛肝菌內(nèi)生真菌的群系，其中蓋姆斯木霉菌株表現(xiàn)出的拮抗作用，表明其具有一定的生防應(yīng)用潛力，可為牛肝菌等大型真菌生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)的菇體腐爛和根腐病，提供一定的生防利用價(jià)值。內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物豐富，進(jìn)一步研究其內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎、活性廣泛的次級(jí)代謝產(chǎn)物，對(duì)新型藥用資源開(kāi)發(fā)具有重要的意義，而牛肝菌內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物與其是否相同或相近還有待研究。本文也為之后野生牛肝菌人工馴化過(guò)程中，研究其內(nèi)部環(huán)境與內(nèi)生真菌的關(guān)系提供參考。

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