2 結(jié)果與討論

2.1 真菌毒素的分離優(yōu)化

本研究通過洗脫梯度優(yōu)化結(jié)合串接質(zhì)譜MRM模式。可有效避免復(fù)雜基質(zhì)對(duì)真菌毒素檢測的干擾，并獲得最優(yōu)的分離效率。通過對(duì)離子化條件、離子對(duì)的篩選以及各毒素目標(biāo)物的碎裂能和去簇電壓進(jìn)行優(yōu)化(如表1所示)，以期獲得最優(yōu)靈敏度。結(jié)合28種真菌毒素目標(biāo)物的結(jié)構(gòu)性質(zhì)差異，分別使用正、負(fù)電離模式，其MRM譜圖如圖1和圖2所示。

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 方法的線性關(guān)系、檢出限、定量

取空白食用油樣品，按照1.2節(jié)中方法進(jìn)行前處理，制備空白基質(zhì)提取液。向空白基質(zhì)提取液中加入適量的混合標(biāo)準(zhǔn)液配制標(biāo)準(zhǔn)工作液。按照1.3節(jié)中的條件進(jìn)行測定。以各毒素目標(biāo)物的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線。分別計(jì)算各毒素在3倍信噪比和10倍信噪比響應(yīng)時(shí)對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度，確定方法對(duì)于各目標(biāo)物的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)，結(jié)果見表2。從結(jié)果可以看出，各毒素目標(biāo)物在其對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。相關(guān)系數(shù)均大于0.999，線性范圍滿足風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)控的需求。

2.2.2 方法回收率及精密度

為有效避免食用油基質(zhì)對(duì)真菌毒素提取效率的影響，綜合考慮28種真菌毒素的極性差異，采用分步提取法，使用不同有機(jī)相比例的提取液進(jìn)行提取。首先使用乙腈/水/甲酸(V乙腈:V水:V甲酸=80:20:0.1)對(duì)非極性目標(biāo)化合物(如黃曲霉毒素等)進(jìn)行提取。第2步使用乙腈/水/甲酸(V乙腈:V水:V甲酸=20:80:0.1)，對(duì)極性較大的化合物(如伏馬毒素等)進(jìn)行提取。合并提取液以提高各毒素目標(biāo)物的提取效率。

圖3對(duì)比了80％乙腈(2％甲酸)單一溶劑提取和分步提取方法對(duì)于伏馬毒素回收率的影響。試驗(yàn)結(jié)果顯示，分步提取法對(duì)伏馬毒素回收率具有明顯的提升。

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