對兩種方法測定的煙堿總量進行Shapiro-Wilk檢驗，加和總量顯著性sig.=0.294（>0.05），測定總量顯著性sig.=0.537（>0.05），均服從正態(tài)分布。對兩個方法測定的煙堿總量結果進行配對T檢驗，結果見表6?？芍嚓P系數(shù)為0.866，顯著性sig.=0.026（<0.05），說明兩個方法的測定結果具有較高的相關性，且變化趨勢一致。配對樣本檢驗的sig.（雙尾）=0.006（<0.05），t=4.629，雖然兩種方法測定的煙堿總量偏差均在10%以內(nèi)，但也存在一定的顯著性差異。通過液液萃取法分別測定游離態(tài)和質(zhì)子態(tài)煙堿的加和煙堿總量略高于CRM 62方法直接測定的結果，這可能是由于二氯甲烷多次萃取誤差和正己烷萃取效率的共同影響導致的。

2.2.2 煙堿自由基系數(shù)(αfbn)

煙堿自由基系數(shù)(αfbn)為游離態(tài)煙堿在煙堿總量中的比率，數(shù)值介于0~1之間，反映樣品體系中游離態(tài)和質(zhì)子態(tài)煙堿的分布情況。αfbn值越大，游離態(tài)煙堿的比例越高，可產(chǎn)生更快、更強烈的喉部刺激和生理反應。αfbn按照公式（1）計算：

式中：和分別表示樣品中的游離態(tài)和質(zhì)子態(tài)煙堿濃度，μg/g。

研究表明，游離態(tài)和質(zhì)子態(tài)煙堿的分布受到樣品體系的酸堿平衡影響，通過Henderson-Hasselbach方程可以推導游離態(tài)煙堿在樣品體系中的比例，建立游離態(tài)煙堿比例與pH之間的關聯(lián)。因此，通過測定電子煙煙液的pH，可以推算樣品體系中游離態(tài)煙堿占煙堿總量的比例，即αfbn。根據(jù)公式（1）和（2）可得到根據(jù)pH值推導αfbn的公式（3）。

式中：pKa為煙堿解離平衡常數(shù)，單質(zhì)子態(tài)時，pKa=8.01。

但是，電子煙煙液中的游離態(tài)與質(zhì)子態(tài)煙堿的分布情況不僅受到酸堿平衡的影響，也與樣品基質(zhì)的化學組成有關。因此，用于表征煙堿形態(tài)分布的αfbn值不僅受到推導或測定方法的影響，也與樣品自身性質(zhì)等有關。

通過液液萃取法測定PG-VG樣品中的游離態(tài)煙堿和質(zhì)子態(tài)煙堿質(zhì)量分數(shù)，根據(jù)公式(1)得到αfbn計算值，測定樣品的pH，根據(jù)公式(3)得到αfbn推算值，見表7。

對兩組αfbn值進行Shapiro-Wilk檢驗，αfbn計算值的顯著性sig.=0.248（>0.05），αfbn推算值的顯著性sig.=0.301（>0.05），均服從正態(tài)分布。配對T檢驗結果（表8）顯示，兩個方法得到的αfbn值的相關系數(shù)為0.997，顯著性sig.=0.00（<0.05），兩者高度正相關。配對樣本檢驗的sig.（雙尾）=0.284（>0.05），兩種方法得到的αfbn值之間無顯著差異。

在配制的PG-VG樣品體系中，僅有丙二醇、甘油和煙堿鹽存在，沒有其他因素對體系酸堿平衡產(chǎn)生影響，二氯甲烷液液萃取法測定得到的αfbn值與pH推算結果高度相關，沒有顯著性差異。說明二氯甲烷萃取法能夠分別萃取游離態(tài)和質(zhì)子態(tài)煙堿，結果能夠準確反映煙堿的總量和形態(tài)分布情況。

2.2.3 PG-VG配比對αfbn的影響

丙二醇和甘油的總量占電子煙煙液產(chǎn)品的絕大部分，是電子煙煙液中的主體組分。丙二醇和甘油由于其良好的霧化性能，在電子煙中常作為霧化溶劑使用，電子煙加熱霧化產(chǎn)生丙二醇-甘油煙霧，攜帶煙液中的香氣成分和煙堿形成氣溶膠，供使用者吸食。為考察不同的PG-VG配比對煙堿形態(tài)分布的影響，配制VPG?VVG分別為1?0、2?1、1?1、1?2和0?1共5種配比，且含有相同煙堿質(zhì)量分數(shù)的水楊酸煙堿鹽樣品，測定其αfbn值，結果見圖3。

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