北方偉業(yè)計量集團(tuán)有限公司
pDNA Listeria的特性值由8個不同的實驗室用UV方法協(xié)同測定，檢測結(jié)果通過統(tǒng)計檢查以確認(rèn)每組數(shù)據(jù)沒有異常值和顯著差異后，將8個實驗室的結(jié)果平均值作為該pDNA標(biāo)準(zhǔn)品的特性值。進(jìn)而參考ISO指南35,根據(jù)公式(3)計算質(zhì)粒DNA在定值過程引入的不確定度(uq):
其中：s為總平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，p為實驗室數(shù)目。
pDNA的不確定度由三部分組成，分別是：由于分裝過程中不均勻性引入的不確定度(uh)、長期保存引入的不確定度(us)、定值過程引入的不確定度(uq)。按照公式(4)計算參考物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：
計算擴(kuò)展不確定度時，應(yīng)將標(biāo)準(zhǔn)不確定度乘以包含因子(k,k=2)。所以，擴(kuò)展相對不確定度計按公式(5)計算：
分別對pDNA和從Listeria:H7標(biāo)準(zhǔn)菌株中提取的gDNA通過A260進(jìn)行定量。根據(jù)單增李斯特菌基因組大小2.90 Mbp估算gDNA的拷貝數(shù)，并基于4 271 bp估算pDNA Listeria的拷貝數(shù)。公式(6)用于計算每微升質(zhì)粒DNA和基因組DNA(gDNA)的拷貝數(shù)。
定量完成后，分別使用2×106～2×101拷貝/L的pDNA Listeria和gDNA制備10倍稀釋系列濃度樣品用于進(jìn)行qPCR檢測。qPCR分析使用ABI SYBR FAST qPCR Master Mix(2×),在八聯(lián)管中以25μL體積進(jìn)行PCR反應(yīng)(引物序列和擴(kuò)增子大小見表1),每個反應(yīng)均含10 pmol/L引物。PCR程序：95℃預(yù)變性10 min,95℃變性30 s,55℃退火45 s進(jìn)行40個循環(huán)。根據(jù)qPCR結(jié)果生成pDNA和gDNA的五點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線。
使用SPSS 16.0和Graphpad 5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。均勻性測試使用單向方差分析。穩(wěn)定性分析使用單向線性回歸分析來計算斜率β1,當(dāng)|β1|
合成了含有hlyA、plcB、inlA基因的DNA片段，并將該片段插入克隆載體pUC57中，制備了重組質(zhì)粒pDNA Listeria(見圖1)。pDNA經(jīng)提取純化后，經(jīng)測序證實，重組質(zhì)粒中插入片段的序列準(zhǔn)確度為100%,符合預(yù)期(見圖2)。同時pDNA的A260/A280比值為1.863±0.234,介于1.8～2.0之間，A260/A230的比值超過2.0,表明該pDNA溶液中無乙醇、蛋白質(zhì)或RNA污染。
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制備一種單核細(xì)胞增生李斯特菌的特異性單鏈抗體捕獲磁珠（scFv-IMBs），通過用人工污染的方式評價scFvIMBs的效果。在不同的增菌培養(yǎng)體系中以市售磁珠（Dyna-IMBs）作為對照，通過定性、定量培養(yǎng)技術(shù)和PCR檢測技術(shù)，分析scFv-IMBs在法蘭克福香腸中捕獲與分離單核細(xì)胞增生李斯特菌和英諾克李斯特菌的能力。
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可食用動物加工成食品后，在養(yǎng)殖過程中使用的獸藥有可能會有殘留，如抗生素、抗菌劑等。SHARMA等人利用AuNPs類過氧化物酶活性和Ky2適配體構(gòu)建“turn-off/turn-on”傳感器，實現(xiàn)了卡那霉素的高靈敏快速檢測，檢測限1.49nmol/L，時間3~8min，比傳統(tǒng)的鹽誘導(dǎo)AuNPs聚集方法靈敏15倍，速度快20倍。
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了解安吉縣食品中食源性致病菌污染狀況，為食品安全管理提供依據(jù)。方法 于2017—2019年采集安吉縣水產(chǎn)品、餐飲食品和生冷鹵食等10類食品樣品，按照相關(guān)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)檢測沙門菌、致瀉性大腸埃希菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌（單增李斯特菌）、阪崎腸桿菌、銅綠假單胞菌、糞鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌和霍亂弧菌11種食源性致病菌。結(jié)果 共采集食品樣品785份，檢出食源性致病菌113株，檢出率為14.39%。
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