（7）單因素試驗

以紅花籽粕的水解度和還原力為試驗指標(biāo)，以超聲時間、超聲溫度、pH、酶用量為試驗因素，做單因素試驗，分析各因素對紅花籽粕的水解度和還原力的影響。

（8）正交試驗

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，對影響蛋白酶的水解度和還原力的主要因素超聲時間、超聲溫度、pH、酶用量等進行L₉（3⁴）正交試驗，以確定蛋白酶酶解的最佳的工藝條件。正交實驗因素水平見表1。

二、實驗結(jié)果與分析

1、L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

在波長275nm下，測得吸光度A，結(jié)果如表2。

以L-酪氨酸濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)得L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖1。

由圖1得出L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=0.0175X-0.0024，R²=0.9998，R²＞0.997表明L-酪氨酸在0-60μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2、超聲波處理前后蛋白酶的變化

分析三種蛋白酶未經(jīng)超聲處理和超聲處理的酶活力的變化，根據(jù)（1）公式計算出酶活力。

實驗結(jié)果表明，木瓜蛋白酶的活性提高了2.96倍，枯草芽孢桿菌中性蛋白酶提高了1.91倍，胰蛋白酶的活性提高了1.17倍，木瓜蛋白酶的活性提高最快，試驗結(jié)果證明在55℃條件下用超聲波處理10min促進了酶的分解，提高了蛋白酶的活力，由數(shù)據(jù)看出木瓜蛋白酶提升最快，所以選取木瓜蛋白酶進行工藝研究。

3、單因素實驗

（1）超聲時間對紅花籽粕水解度的影響

在酶用量為2.9%、pH7.0、超聲溫度為55℃的條件下，分別測超聲時間為5min、10min、15min、20min、25min的情況下水解1h，其水解度和還原力結(jié)果如圖2、圖3所示。

由圖2，圖3可知，超聲時間的改變水解度和還原力都受到了影響，水解度在超聲時間為10min的時候最大，之后的隨著時間增長，還原力下降明顯，可能是酶失活，水解度下降；還原力在超聲時間為15min的時候最大，其還原力最強。綜合考慮，認(rèn)為超聲時間10min最為合適。

（2）超聲溫度的對紅花籽粕水解度的影響

在酶用量為2.9%、pH7.0、超聲時間為10min的條件下，分別測超聲溫度為35℃、45℃、55℃、65℃、75℃的情況下水解1h，其水解度和還原力結(jié)果如圖4、圖5所示。

由圖4可知，先是隨著超聲溫度的增加，紅花籽粕的水解度增大，在超聲溫度是65℃時，水解度最大，然后開始出現(xiàn)下降趨勢，說明在65℃左右時可能是由于熱變性引起的水解度最大；由圖5可知，先是隨著超聲溫度的增加，紅花籽粕的還原力增大，在超聲溫度是55℃時，還原力最大，然后開始出現(xiàn)下降趨勢，但是下降不明顯。綜合考慮水解度、還原力等因素，認(rèn)為最合適超聲溫度為65℃。

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