3、測定方法

(1)方法一：50％乙睛-水[高效液相色譜級(HPLC級)]作為流動相，控制流動相的流速為1.48～1.52mL/min。

控制0.05mol/L氫氧化鈉溶液和OPA-MERC反應溶液(試劑制備見下)的流速分別為0.48～0.52mL/min。柱溫為35℃，水解室的溫度為100℃。熒光檢測器的激發(fā)波長為340nm，發(fā)射波長為455nm。狹縫寬度分別為15m和12nm。檢測器的光電倍增管設為低值，時間常數(shù)為1s。調節(jié)檢測器靈敏度，使1.0ng克百威溶液的響應為記錄儀或積分儀量程的45％～55％。基線噪聲應該＜2％，氨基甲酸酯類殺蟲劑應按照圖7-2的步驟洗脫。

如果系統(tǒng)停用幾天，則用甲醇代替水移動相清洗系統(tǒng)。從儲液器中倒出氫氧化鈉和OPA-MERC反應溶液，并用水清洗儲液器和相連的管子后，再用甲醇清洗。當再次使用系統(tǒng)時，將流動相改為水(HPLC級)，在儲液器中加反應溶液前用水清洗儲液器和相連管子。

過濾由凈化后所得到的圓底燒瓶中的甲醇提取液，將收集到的濾液(約4.5mL)置于10mL離心管或其他合適的容器中。因為樣品濃度已知，因此收集的濾液體積多少不是十分重要。如果溶液要求稀釋，則吸取一定量溶液至另一容量瓶定容至一定體積備用。取10μL甲醇溶液進樣。通過農藥樣品在色譜圖上的保留時間來定性。通過將待測農藥色譜峰的峰高或峰面積與已知量的標準樣品的峰高或峰面積相比較來測得未知農藥殘留的含量。為了保證農藥殘留量測定的可靠性，進待測樣品后立即進標樣，待測樣品色譜峰和標樣色譜峰應匹配在±25以內。

(2)方法二：此法用于不需要柱后水解和衍生化的熒光農藥殘留檢測。高效液相色譜系統(tǒng)的建立與操作同上述方法一，區(qū)別在于：水解室在室溫下操作；熒光檢測器的激發(fā)波長為288nm，發(fā)射波長為330nm。將氫氧化鈉溶液和OPA-MERC反應溶液加入流動相時，關閉泵或氮氣流。

測定操作方法同方法一。

(3)試劑制備

①乙腈：全玻璃蒸餾裝置重蒸。在使用前，進行脫氣處理(將乙腈置于玻璃瓶中，抽真空并用磁力攪拌子緩慢攪拌5min)，經(jīng)過處理的乙腈優(yōu)于高效液相色譜級，可以避免產生雜峰。

②MERC：2-巰基乙醇(MERC)。

③甲醇：全玻璃蒸餾裝置重蒸。

④鄰苯二醛(OPA)：色譜級。

⑤0.05mol/L硼酸鈉緩沖溶液：稱取19.1g分析純：Na₂B₄0₇·10H₂0，用約500mL脫氣的高效液相色譜級水在水浴中加熱溶解，室溫下冷卻，再用脫氣的高效液相色譜級水定容至1L，輕輕地將溶液搖勻，盡量避免空氣進入溶液中。

④0.05mol/L氫氧化鈉溶液：即取一份氫氧化鈉(碳酸鈉的含量＜5％)。用一份水溶解。塞緊蓋后靜置大約10d，直到碳酸鈉沉入下層。吸取27mL上部澄清的氫氧化鈉溶液，轉入10mL容量瓶，并用水定容，得到5mol/L氫氧化鈉溶液。吸取10mL5mol/L氫氧化鈉溶液，加入1L容量瓶中，用脫氣的高效液相色譜級水定容，輕輕地將溶液搖勻，盡量避免空氣進入溶液中。

⑦水(高效液相色譜級)：商品純水或用純化水裝置制備的蒸餾水或去離子水，用于高效液相色譜時，按乙腈脫氣的相同方法進行脫氣。水必須盡量純化以防止堵塞高效液相色譜柱或出現(xiàn)異常峰形。用于高效液相色譜的水必須是高效液相色譜級的(不特別指明為高效液相色譜級的水是指蒸餾水)。

⑧OPA-MERC反應溶液：稱取500mg鄰苯二醛(OPA)加入1L容量瓶中，用10mL甲醇溶解，加入500mL0.05mol/L硼酸鈉緩沖液和1mL2-巰基乙醇(MERC)。用硼酸鈉緩沖液定容，輕輕地將溶液搖勻，盡量避免空氣進入溶液中。(從市場購得的塑料瓶中的硼酸鹽溶液或者低純度的鄰苯二醛會造成熒光背景過高)。制備的溶液可以在室溫下保存2d，在冰箱或在氦氣保護下可以儲存1周左右。

二、苯脲類除草劑多殘留分析

(一)方法原理與適用性

苯脲類除草劑用甲醇提取，提取液采用液液分配和弗羅里硅土柱色譜凈化。殘留物采用反相柱，柱后光解、衍生化，衍生物經(jīng)高效液相色譜(HPLC)熒光檢測器檢測。

本方法可用于14種非脂肪性樣品中至少14種苯脲類除草劑在0.05mg/kg、0.5mg/kg和1.0mg/kg水平的殘留分析。

(二)標準溶液配制

每種標準品用高效液相色譜級異丙醇配制儲備溶液(1mg/mL)。取適量的每種儲備標準溶液混合，用乙腈-水(高效液相色譜級)(1∶1)稀釋成工作標樣。用1.25μg/mL的標樣進行高效液相色譜檢測。儲備溶液保存在冰箱中，每周重新配制工作標樣。

(三)提取

稱取50g樣品，加入離心瓶中，加100mL甲醇，用Polytron勻漿儀，速度8檔，勻漿1.5min。勻漿液以1500r/min離心5min，傾出80～100mL上清液，用玻璃棉過濾，250mL量筒接收。向離心瓶中加100mL甲醇，8檔勻漿1min。離心，上清液用玻璃棉過濾，全部轉入上面的250mL量筒。記錄全部甲醇提取液體積。

(四)液液分配

將甲醇提取液全部轉入500mL分液漏斗。加30mL飽和氯化鈉溶液和50mL正己烷，振搖30s，靜置分層。下層水相轉入1L分液漏斗中，分液漏斗中先加500mL水和30mL飽和氯化鈉溶液。棄去己烷相。向1L分液漏斗中加200mL二氯甲烷，振搖1min。二氯甲烷相經(jīng)25mm×50mm無水硫酸鈉柱脫水，轉入裝好的具5mL刻度接收瓶的500mLK-D濃縮器中。水相用100mL二氯甲烷提取2次，脫水后一并轉入K-D濃縮器。用50mL二氯甲烷淋洗硫酸鈉柱，淋洗液一并轉入K-D濃縮器。在K-D濃縮器中加入沸石，濃縮至約3mL，轉入弗羅里硅土柱凈化。

(五)弗羅里硅土柱凈化

稱取4g活化的弗羅里硅土，裝入10mm內徑色譜柱，上面加1cm硫酸鈉，用30mL二氯甲烷預淋，棄去淋洗液。

當二氯甲烷層接近硫酸鈉層頂部時，將具5mL刻度接收瓶的250mLK-D濃縮器置于色譜柱下。將濃縮的提取液轉入色譜柱，容器用約3mL二氯甲烷潤洗，潤洗液轉入色譜柱。

當提取液接近硫酸鈉層頂部時，用3mL二氯甲烷淋洗色譜柱2次，使每次的淋洗液均接近硫酸鈉層頂部。最后一次潤洗液接近硫酸鈉層頂部時，用50mL20％丙酮-二氯甲烷淋洗色譜柱。淋洗液在蒸汽浴上濃縮至約3mL，移去接收瓶，40℃水浴用氮氣濃縮至干。移取2mL乙腈-水(高效液相色譜級)(1∶1)，加入接收瓶中。

(六)測定

測定采用高效液相色譜儀(HPLC)進行，柱后光解、衍生，熒光檢測。

1、原理乙腈一水中的殘留物以甲醇一水為流動相，經(jīng)C₁₈反相柱梯度洗脫、分離，柱中洗脫的殘留物(流出物經(jīng)過Teflon套管以增加在紫外光下的暴露)在線光解為胺，胺在線與鄰苯二醛及2-巰基乙醇反應生成熒光基團，通過熒光檢測器檢測。本法對苯脲類除草劑有極強選擇性。

2、儀器

(1)溶劑過濾裝置：具Luer—Lip頭的10mL注射器，配備直徑13mm的sueling不銹鋼過濾頭、直徑13mm的5μmLS型濾器或直徑13mm用聚丙烯固定的0.2μm尼龍濾膜。也可用元需注射器的預裝好的裝置。

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